医院检验科质量手册制度微生物检验组操作手册.docx

PAGE 273 南通市第一人民医院检验科质量手册 微生物检验组操作手册 标本的接种与处理标准操作程序（SOP-401） 1.目的：规范标本的接种与处理，提高细菌检出率。 2.SOP-401变动程序：由操作者提出，并经科主任审核。 3.范围：各种细菌培养的标本。 4.溯源:全国临床检验操作规程(第二版)。 5.标准操作： 5.1一般细菌培养、鉴定 适用于本项检查的标本是指除血液、尿液和粪便等有特殊处理要求的标本，以及脓、痰、创面、胆汁、CSF、胸腹水、咽拭子等。 5.1.1样品采集与处理 5.1.1.1在疾病早期或症状、体征明显时，最好在抗生素使用之前采集。 5.1.1.2选择合适的解剖部位并以正确的方法和设备采集标本。 5.1.1.3避免固有菌群的污染，尽可能保证样本代表感染过程。 5.1.1.4采集足够的数量，因标本量不足可能产生假阴性结果。 5.1.1.5每个标本都要标明病人的姓名、住院号、来源、特殊部位、采集的日期时间和最初的采集者。 5.1.1.6将标本放在无菌并且有利于可疑病原菌生长的容器或培养液中，防止渗漏和潜在的安全隐患，本实验室指定适用于本项检查的容器是无菌试管、无菌拭子、无菌痰杯及各种灭菌标本留取容器。 一般细菌可在合适的培养基（如血平板、巧克力平板）上，在一定的温度、气体等条件下生长繁殖而形成菌落。根据菌落特征、涂片染色镜检、生化反应和血清学试验可做出鉴定。 5.2 检验流程 5.2.1流程图 样品 → 接种 → 挑取可疑菌落 → 涂片染色镜检 → 生化反应、鉴定 →报告。 5.2.2 操作说明 5.2.2.1样品 脓、痰、创面、胆汁、CSF、胸腹水、咽拭等。 5.2.2.2接种 血平板（痰、CSF需加巧克力平板），35℃过夜，初次分离需5-10%CO2。 5.2.2.3镜检 挑取可疑菌落涂片，革兰染色镜检。 5.2.2.4生化反应、鉴定 手工生化试验： 5.2.2.4.1葡萄球菌：凝固酶、甘露醇、尿素、新生霉素、麦芽糖、木糖、蔗糖、硝酸盐、多粘菌素B、同时观察菌落颜色和溶血情况。 5.2.2.4.2链球菌、肠球菌：触酶、七叶苷、肉汤、6.5%Nacl、CAMP、乳糖、山梨醇、阿拉伯糖。 5.2.2.4.3致病性大肠埃希菌：KIA、苯丙氨酸、葡萄糖酸盐、甘露醇、麦芽糖、IMViC、硝酸盐。 5.2.2.4.4变形杆菌：KIA、苯丙氨酸、麦芽糖、靛基质、鸟氨酸。 5.2.2.4.5灰凸菌落，典型的阴性球杆菌：KIA、葡萄糖、甘露醇、靛基质、枸橼酸盐、硝酸盐、丙二酸盐、44℃。 5.2.2.4.6革兰氏阴性杆菌，氧化酶阴性：KIA、尿素、苯丙氨酸、葡萄糖酸盐、甘露醇、葡萄糖、IMViC、硝酸盐。 5.2.2.4.7革兰氏阴性杆菌，氧化酶阳性：KIA、葡萄糖、甘露醇、靛基质、枸橼酸盐、硝酸盐、七叶苷、乙酰胺。 5.2.2.4.8可疑气单胞菌，氧化酶阳性：KIA、葡萄糖、甘露醇、靛基质、枸橼酸盐、硝酸盐、七叶苷、赖氨酸、蔗糖、VP（25℃）。 5.2.2.4.9 可疑弧菌，氧化酶阳性：同气单胞菌生化，另加不同浓度Nacl。 5.2.2.4.10缓慢生长分枝杆菌：暗产色、光产色、耐热触酶、硝酸盐、尿素、吐温-80。 5.2.2.4.11快速生长分枝杆菌：45℃生长、暗产色、光产色、MAC琼脂（28℃）、硝酸盐、铁吸收试验（28℃）、5% Nacl肉汤（28℃）、阿拉伯糖、木糖、卫茅醇、枸橼酸盐（28℃）、甘露醇（28℃）。 另见下表： 一般细菌生化反应和鉴定流程 菌落、涂片 鉴定 G－球菌 氧化酶、DNA酶、葡萄糖、麦芽糖、蔗糖或接种API NH G－杆菌 OX（＋） ATB ID 32GN或API 20Ne或手工生化 OX（－） ATB ID 32E或API 20E或手工生化 G＋杆菌 视情况而定 G＋芽胞杆菌 根据涂片染色、菌落特征、简单手工生化反映鉴定 李斯特菌、棒状杆菌 API Coryne G＋球菌 触酶（＋） ID Staph或手工生化 触酶（－） ID Strep或手工生化 真菌 科玛嘉显色平板或ATB ID 32C、API 20 C AUX 5.2.2.5菌种鉴定 按检验流程、操作说明、生化反应、鉴定步骤中所述方法操作，将可疑菌落接种于相应的培养基或板条上，按要求培养足够时间后，手工或用计算机自动读取结果，打印报告。 5.2.2.6报告 菌种名、无细菌生长或未培养出病原菌等。 5.3注意事项 5.3.1采样时必须注意无菌操作，须在使用抗生素前进行，并及时送检。 5.3.2分离培养须接种合适的培养基，鉴定须选用适当的反应或试剂条。 5.3.3结果判断时须注意区别病原菌和正常