一种土壤中烟草疫霉菌的快速分离鉴定及计数方法-中国农学通报.PDF

中国农学通报 2012,28(09): 163-168 Chinese Agricultural Science Bulletin 一种土壤中烟草疫霉菌的快速分离鉴定及计数方法 1 2 2 1 1 1 王 晗 ，严占勇 ，张定贵 ，吴卫玲 ，李 洪 ，李振轮 1 2 （西南大学资源环境学院，重庆400716 ；四川省烟草公司达州市分公司，四川达州635006） 摘 要：为了建立一种土壤烟草疫霉菌快速计数方法，将稀释平板法与选择性培养基相结合，进行了微量 -2 真菌DNA 提取及定性PCR ，结果表明：10 稀释浓度和选择性培养基能很好抑制绝大多非疫霉菌和所有 细菌生长，有利于对土壤中烟草疫霉菌进行分离计数；微量真菌DNA 提取方法提取的菌落DNA 能够满 足定性PCR 的要求，采用的特异引物只能从疫霉菌中扩增到737 bp 的特异性片段；利用真菌ITS 验证了 该方法确定的6 个土壤烟草疫霉菌与已报道烟草疫霉菌相似度达99% 以上；表明该方法完全适宜于土 壤中烟草疫霉菌数量的鉴定及计数，具有相对准确、低成本、简单易推广的优点。 关键词：土壤；烟草疫霉菌；分离；鉴定；计数 中图分类号：Q93-3 文献标志码：A 论文编号：2011-2630 A Fast Method of Isolation, Identification and Counting of Phytophthora nicotianae from Soil 1 2 2 1 1 1 Wang Han , Yan Zhanyong , Zhang Dinggui , Wu Weiling , Li Hong , Li Zhenlun 1 ( College of Resources and Environments, Southwest University, Chongqing 400716; 2Sichuan Province Tobacco Company, Dazhou Branch, Dazhou Sichuan 635006) Abstract: The aim was to establish a fast counting method for Phytophthora nicotianae in soil. The pour plate method and the application of selective culture medium were combined to count P. nicotianae in soil. The mini-preparation method of fungal DNA and the qualitative PCR were carried out. The results showed that , -2 when cultured in selective medium with the concentration of 10 , most of the non-P. nicotianae could