蛋白质组值学基础.pptVIP

2、特点（1）银染分酸性（ AgNO3）与碱性（Ag(NH3)2+） 两种,酸性染色背景浅、容易控制，碱性灵敏度稍高， 但背景深、不容易控制。 （2）相对于考染，灵敏度高，可达200pg。（3）但由于存在戊二醛的特异性反应， 对下一步的酶切肽谱提取存在困难, 增敏过程蛋白质被部分提取至胶外。 (三)负染 1、原理（锌-咪唑染料） 咪唑存在时，自由或弱结合的锌离子以锌-咪唑形式 沉淀下来，而大部分锌离子因与蛋白质结合牢固， 留在胶上，从而导致半透明背景上的空白区域， 就是负染过程。  2、特点（1）负染能提高SDS胶上蛋白质的回收率， 负染色结果在凝胶表面产生半透明背景，而凝胶 显示黑色背景或相应底色，蛋白质以透明形式被 检测出来，而且蛋白质被很好地保存下来。（2）显色过程仅需5-15min（3）蛋白质易从胶上取出，一般用EDTA络合金属离子 就可转移出蛋白质。（4）灵敏度15ng。 （四）荧光染色1、原理：利用荧光染料对蛋白质进行标记，在光激发下产生荧光，通过扫描得到图象。比如用甲基Cy3与甲基Cy5两种染料分别对两个不同蛋白样品进行荧光标记，并在一