舌鳞癌Tca8113细胞系中高,低醛脱氢酶活性细胞亚群差异表达基因cDNA文库的构建.docVIP

舌鳞癌Tca8113细胞系中高、低醛脱氢酶活性细胞亚群差异表达基因cDNA文库的构建 孙守娟 季平 邓诚 李颖 邹波 漆小娟（重庆医科大学附属口腔医院颌面外科，重庆 401147） [摘要]目的 构建舌鳞癌Tca8113细胞系中高、低醛脱氢酶活性(high /low aldehyde dehydrogenase activity，ALDHhigh/ALDHlow)细胞差异基因cDNA文库。方法 用流式细胞仪检测ALDEFLUOR?染色的Tca8113细胞中干细胞标志物ALDH的表达，并收集 ALDHhigh和ALDHlow细胞；用 Trizol分别提取两亚群细胞的总RNA；用抑制性消减杂交（SSH）对两组RNA进行差异基因筛选和扩增，扩增产物与pMD18-T载体连接并转化大肠杆菌DH5a。文库扩增后，每库随机挑取24克隆进行酶切、测序及同源性分析。结果 分选得到ALDHhigh和ALDHlow两亚群细胞，其中ALDHhigh细胞的比例为2.5%；分光光度计测得ALDHhigh和ALDHlow的RNA OD260/OD280的比值分别为1.93和1.92；构建了ALDHhigh和ALDHlow细胞差异基因cDNA双向文库，每个库约500个克隆菌落，每库随机挑选24个菌落进行PCR分析，克隆片段均匀分布在200bp～700bp，无假阳性克隆。测序结果经同源性比对分析和Pubme