小鼠骨髓细胞微核试验课件.pptVIP

小鼠骨髓细胞微核试验 一、目 的 学习和掌握小鼠骨髓多染红细胞（PCE）微核测定方法 二、原 理 1.微核的形态： 2.观察、检测对象： 3.微核试验的意义： 三、实验动物、器材与试剂 1.实验动物：昆明种小白鼠 2.实验器材：台式离心机、带油镜头显微镜、细胞计数器、手术刀、手术剪等 3.实验试剂：甲苯、环磷酰胺、小牛血清、生理盐水、快速染液等。 四、操作步骤 （一）试验动物及处理 1.动物选择：小鼠，体重18～20g，7～12周龄。每组小鼠数量4只。 2.染毒途径：经口染毒。 3.染毒次数：每天染毒一次，连续4天，第5天取样。 4.剂量选择：1/2 LD50为最高剂量。甲苯灌胃0.06ml/20g、0.03ml/20g、0.02ml/20g。 5.对照组：阳性对照组环磷酸胺（60mg/kg）腹腔注射一次。阴性对照组使用等体积的溶剂。 （二）骨髓液的制备和涂片 颈椎脱臼处死动物 将两腿股骨取下 剔去肌肉 生理盐水洗去血污和碎肉 剪去两端的骨质 用带针头的1ml注射器吸取小牛血清 插入骨髓腔内 将骨髓冲入离心管 混匀 1000r／min离心 10min 弃去多余上清液，留下约0.5ml与沉淀物混匀 取一滴于清洁玻片上，推片。 阳性及阴性对照组按上述方法同时进行处理。 （三）固定、染色 推片晾干 加6~10滴染液盖满玻片30秒 加水10~15滴混匀 染色6~8分钟 洗去 染液 （五）观察结果 1.先在低倍镜下选择分布均匀，染色的区域 2.在油镜下观察计数。 3.计数 300~600个PCE中含微核的 PCE数，并且计数200个细胞中PCE与NCE的比值。 （PCE细胞呈灰蓝色，正染红细胞呈桔黄色） （微核多呈圆形，边缘光滑整齐，嗜色性与核质一致，呈紫红色或蓝紫色。） 五、结果分析与评价 微核率以千分率表示。每只动物为一观察单位。 正常的PCE／NCE比值约为1（正常范围为0.6～1.2）。 阳性对照组微核发生率一般大于千分之五，且与阴性对照组比较有统计学意义。 阳性结果：受试物至少一个剂量组与对照组比较有统计学意义，且有剂量反应关系。 六、注意事项 该试验的关键步骤是制作良好的骨髓涂片及优质的染色。 * *