PCR仪关键热学概念和变温速率.PDFVIP

应用说明1 PCR仪 PCR仪： 关键的热学概念和变温速率 ° 我们经常会在P C R 仪资料和网 温度，C 站上看到关键的热循环参数，但 却很少解释这些数字是如何被 100 推导出的或如何使用。变温速 模块温度曲线 (全部6个分区) 率(ra mp rat e) 、热过冲(t he rma l 90 平均变温速率 overshoot)及其他热学概念是PCR 温度范围 性能的关键，本文将使用A pplied 80 最大变温速率 Biosystems™ PCR仪系统作为标 温度范围 准，对这些概念进行深入解释。 70 此外，还对变温速率进行了测 样本温度曲线 试，并与公布的参数进行比较。 60 (全部6个分区) 变温速率： 时间 最大值vs.平均值，模块vs.样本 图1. 在ProFlex 96孔PCR系统升温过程中，所有六个分区的真实的模块和样本温度曲线。虚 线表示最大变温速率和平均变温速率下的温度范围。 温度循环是所有P C R 反应的基 础，仪器的 “变温”速率将决定 P C R 运行的整体速度。正因如 高，表示可以在更短的时间内达 展示最高的变温速率说明运行速 此，PC R仪制造商会公布 “变温 到特定的温度范围。术语 “升温 度更快。但是，这样的检测方式 速率”，以显示温度随时间的变 速率( u p ra m p) ”和 “降温速率 测得的变温速率往往高于其真实 化速度。变温速率一般以º C/ 秒 (down ramp) ”分别表示加热或冷 值。 表示。在温度与时间曲线中观察 却时的变温速率。毫无疑问，变 此概念，变温速率以曲线斜率表 温模块越快，PC R运行也越快， 示。曲线越陡峭说明变温速率越 因此很多PC R仪制造商试图通过 PCR仪通过加热并冷却金属模块，完成PCR反应的各 Applied Biosystems仪器采用专利算法，根据加样体 个步骤，比如变性，退火和延伸。最常公布的参数是 积计算PCR样本的温度。这使得我们能够公布更准确 最大模块变温速率(maximum block ramp rate) ，亦 的样本变温速率。我们还公布了模块变温速率，可以 称为模块变温速率峰值。最大模块变温速率表示可达 与其他制造商的仪器进行更直接的比较。 到的最高模块性能。在PCR运行过程中，上述最大性 能只在极短的时间内可以达到。PCR仪制造商还会公 概述：样本温度控制 布平均模块变温速率(average block ramp rates) ， PCR仪达到并测量温度的方法取决于制造商。PCR仪 表示在较长的变温范围内温度变化的速率，提供更具 通常仅根据模块温度进行温度编程，不考虑液体样本 代表性的仪器性能和速度评估(图1) 。 的温度。 但仅仅是模块变温速率较快，并不意味着PCR反应的 但仅仅是模块达到了目标温度或 “设置点”，并 液体(样本) 的变温速率也同样迅速。PCR仪的模块热量 不意味着样本也达到了同样的设置点。A p p l i e d 传递至样本还需要时间