基因重组和基因工程 ge说netic recombination and genetic engineering 第 十 四 章.pptVIP

基因克隆的基本步骤 分：分离目的基因和载体DNA。 切：用合适的酶切割上述两者，产生匹配的末端。 接：连接酶将目的基因装入载体。 转：转入宿主细胞。 筛：筛选具有重组DNA分子的阳性克隆。 （一）目的基因的获取 1. 化学合成法 2.基因组DNA文库(genomic DNA library) 3. cDNA文库(cDNA library) 4. 聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR) 体外高效、快速、特异地扩增目的基因或DNA片段的技术。 其原理类似于DNA的体内复制，只是在试管中给DNA的体外合成提供一种合适条件——模板DNA，寡核苷酸引物， dNTPs ,DNA聚合酶，合适的缓冲液系统(Mg2+)和DNA变性、复性及延伸的温度与时间等，使目的DNA得以迅速扩增 . 实验结果 * 化学合成法获取目的基因 由已知氨基酸序列推测可能的DNA序列 合成的基因有：人生长激素释放抑制因子、 胰岛素原、 脑啡肽、干扰素基因等。 组织或细胞染色体DNA 基因片断 克隆载体 重组DNA分子 含重组分子的转化菌 限制性内切酶 受体菌 基因组DNA文库 存在于转化细胞内由克隆载体所携带的所有基因组DNA的集合P356 * 从基因组DNA文库获取目的基因 (genomic DNA library) 限制酶切位点 限制酶消化 除去中间片段 cos L