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血栓止血检验基本方法 河北医科大学第二医院检验科 郭辉 授课专业：血液学检验 教学大纲要求：使同学了解和掌握主要凝血因子检验方法正常参考值和临床意义。 教学重点和难点：凝血的纠正实验、因子活性及含量、常见凝血因子异常的血栓止血性疾病诊断。 讲课提纲：凝血因子检验项目 1．内源性凝血途径 （Intrinisic pathway IP） 2. 外源性凝血途径（Extrinisic pathway EP） 一．内源性凝血因子筛选试验 1．全血凝固时间（CT） 2．复钙时间（RT） 3．硅化管凝血时间（SCT） 4.活化凝血时间（ACT） 5．活化部分凝血活酶时间（APTT） 6．凝血酶原消耗及纠正实验 7．凝血活酶生成实验（B-TGT） 8．单个Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ、Ⅻ因子测定 二．外源性（共同通道）凝血筛选试验 1．血浆凝血酶原时间（PT） 2．肝促凝血酶原激活时间（HPT） 3．稀释蛇毒实验（RVVT） 4．蝰蛇毒磷脂实验（RVVCT） 5．蝰蛇毒复钙实验（RVVRT） 6．凝血酶原时间延长与纠正实验 7．单个因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ测定 一．内源性凝血途径（Intrinisic Pathway） 1.全血凝固时间（CT） 1）普通试管法 7.34±1.27 本方法不太敏感,只能检出因子Ⅷ:C2%的患者。 2）塑料试管法 10-20min 临床意义：延长见于Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ、Ⅻ水平低下者及VDW，严重ⅡⅤⅩⅠ如肝病、新生儿出血、肠道灭菌综合症、应用肝素、低（无）纤维蛋白血症、DIC抗Ⅷ因子抗体等。缩短见于：高凝状态如DIC高凝期、促凝血物质入血、因子活性增高、血栓栓塞性疾病如心梗、不稳定心绞痛、肺栓塞、血栓、脑血管病变。 2．复钙时间（RT） 延长的复钙时间有两种，能被1/10量正常血浆纠正为抗凝物质增多。 NP 2分18秒～4分17秒 临床上为区别复钙时间延长原因 3．硅化管凝血时间（S-CT） NP 23分54秒～4分32秒（15.49～32.08分） 甚敏感可检测FⅧ：C45%患者 临床意义: 4.活化凝血时间(ACT) NP1.70±0.76min(1.14～32.08min) 较为敏感，可以检测出因子Ⅷ:C45%的患者，本法临床上主要用于体外循环中肝素用量的检测，转流期间ACT维持在450～600s，鱼精蛋白中和后ACT130S。 5.活化部分凝血活酶时间（APTT） 在37℃时以白陶土（硅藻土）等作为活化剂激活ⅫⅪ因子，以部分凝血活酶、脑磷脂代替血小板提供凝血的催化表面在钙离子参与下观察其血小板凝固所需时间，是内源性凝血敏感而常用的筛选实验。 NP：31.5-43.5s与正常参考值延长10s才有意义。 临床意义：同全血凝固时间（CT） 6．凝血酶原消耗（PCT）及其纠正实验 原理：生理情况下，血液在凝固的过程中，大部分的凝血酶原（Ⅱ因子）转变为凝血酶而被消耗，故血清中仅剩少量凝血酶原。若在病理情况下FⅧⅨⅪⅫ或PF3明显减少时，因内源性凝血活酶生成发生障碍，凝血酶原的消耗明显减少，故血清中剩余的凝血酶原增多，因此血清凝血酶原时间缩短。本实验主要用于检测内源性凝血因子缺陷第一阶段有无异常敏感的实验，也可作为PF3有无缺陷的筛选试验。 PCT异常的纠正实验 原理：若PCT20秒给于已知凝血因子后，消耗不佳的血清凝血酶原时间得以纠正并且恢复正常，则反映凝血酶原酶生成不佳（障碍）的原因是由于缺乏此种凝血因子所致，用红细胞素作为血小板磷脂代用品作纠正实验时，还可以诊断PF3缺乏症。 结果和临床意义： 25s以上者为纠正。1、2为患者血清、血浆凝血酶原时间；3纠正者为ⅧⅪⅫ缺乏；4纠正者为ⅨⅪⅫ缺乏；第5管纠正者提示PF3 3、4、5都不纠正，同时也不被正常血浆纠正者提示有抗凝物质。 7．Biggs凝血活酶生成实验（B-TGT） 原 理：在血浆中，血浆凝血因子ⅫⅪⅨⅧ，PF3和钙离子的共同作用下，可以生成凝血活酶（凝血酶原酶），据此将病人和正常人吸附血浆、血清、血小板悬液（或人脑部分凝血活酶）进行各种组合以形成混悬液，混悬液使正常基质血浆凝固所需要的时间，即可反映混合液中凝血活酶的活性。若缺乏血浆中某一凝血因子即可影响凝血活酶生成，从而了解受栓者血浆中缺乏的凝血因子。 NP：1. 4-6分中最短时间应为9-11秒,5秒以上为异常。 2．若制备标准曲线 ，受检与正常比60s为正常。 8．单个凝血因子测定（全自动血液凝固分析仪） 二．外源性凝血途径（Extrinisic Pathway, EP） 1.血浆凝血酶原时间（PT，Quick一期法） 原理：在受检血浆中加过量的组织