《致病性大肠埃希氏菌及其检验[1]1》-课件设计（公开）.pptVIP

二、致病性大肠埃希氏菌的检验 （一）、增菌培养 1、以无菌操作的方法称取样品25g，加入225ml营养肉汤培养基中，可用灭菌砂在研钵中磨碎或以均质器打碎样品。 2、取适量接种于乳糖胆盐培养基中，测定大肠菌群MPN，其余移入500ml三角瓶中于36±1℃培养6小时。挑取一环，接种于一管30ml肠道菌增菌肉汤中，42℃增菌培养18小时。 二、致病性大肠埃希氏菌的检验 （二）、分离培养 1、将乳糖胆盐发酵阳性管液与增菌液分别划线接种于麦康凯或伊红美兰琼脂平板上。 2、于36±1℃培养18—24小时观察菌落对于污染严重的食品可直接按划线法接种，不经过增菌过程。不但要注意乳糖发酵的菌落，同时也要注意乳糖不发酵的菌落。 EMB平板照片及原理 原理：伊红美蓝琼脂平板含伊红和美蓝染料，在此亦作为指示剂。大肠菌群发酵乳糖造成酸性环境时，故可染上酸性染料伊红，又因伊红与美兰结合（该两种染料即结合成复合物）使大肠菌群产生带核心的、有金属光泽的深紫色的（龙胆紫的紫色）阳性菌落，从菌落表面的反射光中还可看到绿色金属闪光。在伊红美兰平板上的典型菌落呈紫黑色，圆形，边缘整齐，表面光滑湿润，常有金属光泽。有的由于被检样品影响，亦呈现紫色、粉紫、中心灰紫、无黑心、湿润等，常为大肠杆菌，均应注意挑选。 大肠杆菌在伊红美蓝琼脂平板上的特征 EMB培养基，上为E.coli，下为伤寒杆菌 大肠杆菌在麦康凯琼脂（ＭａｃＣ）的特征 麦康凯琼脂（ＭａｃＣ）或伊红美兰（ＥＭＢ）琼脂平板上，置３７°培养１８—２４小时，检查有无疑似大肠杆菌菌落。大肠杆菌在麦康凯平板上的典型菌落呈鲜艳的桃红、粉红色. 大肠埃希氏菌在麦康凯琼脂平板上的特征 大肠埃希氏菌在麦康凯琼脂平板上的特征 大肠埃希氏菌在麦康凯琼脂平板粘稠菌落的特征 沙门氏菌麦康凯琼脂平板菌落 不发酵乳糖 * 大肠杆菌在伊红美蓝琼脂平板上的特征 致病性大肠埃希氏菌及其检验 大肠埃希氏菌,俗称大肠杆菌,是人类和动物肠道中正常菌群的主要成员,每克粪便中约含109个.大肠埃希氏菌随粪便排出后,广泛分布于自然界.水、牛乳及其他食品一旦检出大肠埃希氏菌，即意味着这些物品直接或间接被粪便污染。 正常情况下，大肠埃希氏菌不致病，而且还能合成维生素B和维生素K,生产大肠菌素，对机体有利。但当机体抵抗力下降或大肠埃希氏菌侵入肠外组织或器官时，可作为条件致病菌而引起肠道外感染。有些血清型可引起肠道感染。致病性大肠埃希氏菌属主要分为五大类，首先根据发病机理分为三大类，1、产毒素型大肠埃希氏菌(ETEC)，2、侵袭型大肠埃希氏菌(EIEC)3、肠道致病性大肠埃希氏菌(EPEC)近来又提出另外两类4、出血性大肠埃希氏菌(EHEC) 5、肠粘附性大肠埃希氏菌(EAEC) 致病性大肠埃希氏菌中，一般认为能产生耐热{ST)和不耐热(LT)肠毒素的两种菌株均可引起人的食物中毒。引起大肠埃希氏菌中毒的主要是一些动物性食品，如乳与乳制品、肉类、水产品等，牛和猪是传播这种病菌、引起中毒的主要原因。 1996年7月在日本就发生了大肠杆菌0157型引起的食物中毒，造成9017多人中毒，10人死亡，其原因与生食萝卜苗有关，其中92例并发出血性肠炎及出血性尿毒症。2001年，再江苏、安徽等地爆发的肠出血性大肠杆菌0157:H7食物中毒，造成177人死亡，中毒人数超过2万人。 如仔猪黄、白痢、猪水肿病、牛腹泻和败血症等均可由大肠杆菌引起。 一、埃希氏菌属生物学特性 形态与染色 本属细菌为革兰氏阴性两端钝圆、中等大小的无芽孢杆菌，绝大多数周生鞭毛，能运动，周身还有菌毛，不产生荚膜，某些菌株有荚膜。 普通大肠埃希氏菌Escherichia Coli 培养特性 1)需氧及兼性厌氧菌 2)对营养的要求不高，在普通琼脂上就生长良好，在15C-45℃范围内均可生长，但最适生长温度为37℃，最适pH为7.2-7.4。 3)在普通琼脂平板上培养24小时，可形成圆形、凸起、光滑、湿润、半透明、边缘整齐、中等大小的菌落．其菌落与沙门氏菌比较相似，但是，大肠杆菌菌落对光(45角折射)观察可见荧光。 4)在肉汤培养基中生长18-24小时变为均匀浑，而后底部出现粘性沉淀物，并伴有臭味。 一、埃希氏菌属生物学特性 5）在鲜血琼脂平板上生长，有些菌株可见β溶血环。 6）在远藤琼脂上长成带金属光泽的红色菌落 7）在S．S琼脂平板上多不生长，少数生长的细菌，也因发酵乳糖产酸而形成红色菌落； 8）在伊红美兰琼脂上形成紫黑色具有金属光泽的菌落 9）在麦康凯琼脂上培养24小时后孤立菌落呈红色 埃希氏菌在S．S琼脂平板上形成红色菌落 在麦康基培养基上培养的大肠埃希杆菌 大肠埃希杆菌产生粉红色乳糖发酵菌落。麦康基培养基是肠道细菌的选择培养基