大肠不耐热肠毒素B亚单位佐剂活性相关蛋白的筛选.PDFVIP

中国药理学通报　ＣｈｉｎｅｓｅＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＢｕｌｌｅｔｉｎ　２０１６Ｄｅｃ；３２（１２）：１７６１～６ ·１７６１· 网络出版时间：２０１６－１２－５１５：１４　网络出版地址：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／３４．１０８６．Ｒ１５１４．０４８．ｈｔｍｌ 大肠不耐热肠毒素Ｂ亚单位佐剂活性相关蛋白的筛选 刘　林，周慧聪，王秋娟，陈思静，马永平 （重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心，生物化学与分子生物学教研室，重庆　４０００１６） ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００１－１９７８．２０１６．１２．０２４ 　　大肠杆菌不耐热肠毒素由产毒型大肠埃希菌 文献标志码：Ａ 文章编号：１００１－１９７８（２０１６）１２－１７６１－０６ （ＥＴＥＣ）产生，因其不耐热，在６０℃处理３０ｍｉｎ即被 中国图书分类号：Ｒ３２９．２４；Ｒ３４１；Ｒ３９２．１１；Ｒ３９２．１２； ［１－２］ 破坏，故称作不耐热肠毒素（ＬＴ） 。ＬＴ是一类 Ｒ３７８２１；Ｒ９７７６ 六聚体大分子，由１个 Ａ亚基 （ＬＴＡ）和５个 Ｂ亚 摘要：目的　通过对大肠杆菌不耐热肠毒素Ｂ亚单位相互作 ［３］ 基 （ＬＴＢ）组成，结构和功能与霍乱毒素相似 。 用蛋白的分析，探讨 ＬＴＢ佐剂活性的分子机制。方法　纯 ＬＴＢ作为ＬＴ的非毒性亚基，能刺激机体产生强烈的 化的ＬＴＢ蛋白和生理盐水分别处理 ＲＡＷ２６４．７细胞，ｐｕｌｌ ［４］ 黏膜和系统免疫 。ＬＴＢ的免疫调节作用包括促进 ｄｏｗｎ实验分离与ＬＴＢ有相互作用的蛋白分子，质谱鉴定这 ＋ 些相互作用蛋白；免疫荧光和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析验证与ＬＴＢ Ｔｈ１和Ｔｈ２型细胞反应的细胞因子的表达，ＣＤ８Ｔ ＋ 相互作用蛋白在细胞内的相互作用。结果　通过质谱鉴定 细胞的凋亡和ＣＤ４Ｔ细胞的增殖；使 Ｂ细胞活化 的ＭＨＣ 、ＩＣＡＭ１、ＣＤ２５、ＣＤ４０分子表达增加，影 了２５种可能与ＬＴＢ存在相互作用的蛋白分子，并构建了其 Ⅱ 相互作用网络图，筛选出可能与ＬＴＢ免疫调节作用相关的 响巨噬细胞［５－６］和 Ｂ细胞的抗原处理和呈递过 蛋白分子；免疫荧光结果显示神经节苷脂能阻断ＬＴＢ进入 ［７，８］ 程 ，以及 ＤＣ的发育和成熟，使 ＤＣ细胞更好的 ＲＡＷ２６４７细胞内，ＬＴＢ在细胞内与ＧＭ１３０存在相互作用， ［９］ 发挥抗原递呈的作用 ，从而达到增强机体对抗原 而Ｖｉｍｅｎｔｉｎ在生理状态下与ＬＴＢ不存在相互作用；ＬＴＢ处 的免疫应答［１０－１２］。然而对于ＬＴＢ引起这些免疫调 理ＲＡＷ２６４７细胞１２ｈ后，ａｃｔｉｎ表达上调，Ｈｓｐｄ１表达无 β 节变化的机制尚不清楚，因而本实验选用小鼠单核 变化。结论　ＬＴＢ佐剂活性的发挥是通过与免疫细胞表面