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第十一章 DNA的复制和修复 一、DNA复制方式 二、参与DNA复制的因子 三、DNA复制过程 四、逆转录 五、DNA损伤的修复 二、 DNA复制的酶学 1.底物 dNTP(dATP,dGTP,dCTP,dTTP) 2.聚合酶 DNA聚合酶I 、II、III 3.模板　单链的DNA母链 4.引物　寡核苷酸引物（RNA) 5.其他酶和蛋白质因子 解链酶，解旋酶， 单链结合蛋白，连接酶　　 （一）DNA聚合酶的活性 5′至3′的聚合活性 5′→ 3′方向 核酸 外切酶活性 5′→ 3′外切酶活性 3′→ 5′外切酶活性 5′至3′的聚合活性（ 5′→ 3′ ） 原核生物中的三种DNA聚合酶? （二）DNA拓扑异构酶(解旋酶） 既能水解，又能打断碱基互补配对的氢键 拓扑酶Ⅰ 切断DNA双链中的一股 拓扑酶Ⅱ 切断DNA双链 （三）单链DNA结合蛋白（SSB） 维持模板处于单链状态 保护单链的完整 （四）引物酶 是RNA聚合酶，合成一段RNA引物 （五） DNA连接酶（ligase） 催化两段DNA之间的连接 三、DNA的复制过程 （一） 复制的起始 1. DNA复制的起点 原核生物从一个固定的起始点开始，同时向两个方向进行的，称为双向复制 2.复制叉的形成 复制叉----复制开始后由于DNA双链解开，在两股单链上进行复制，形成在显微镜下可看到的叉状结构。 3.起始的过程 3.半不连续复制 (三) 复制的终止 复制有终止信号 polⅠ 5′→ 3′外切酶活性水解引物 polⅠ聚合活性填补空隙 DNA连接酶连接缺口。 五、 DNA的损伤修复 突变可分为： 自发突变、人工诱变 突变的意义 突变是进化、分化的分子基础 只有基因型改变的突变 致死性的突变 突变是某些疾病的发病基础 2. 引发突变的因素 3. 突变分子改变的类型 错配 （点突变） 一个碱基改变 缺失、插入和框移突变 片段插入或缺失 重排 较大片段重组或重排 4. 损伤的修复 损伤--复制过程中发生的DNA突变 光修复 切除修复 重组修复 SOS修复 （一）光修复 紫外光照射可使相邻的两个T 形成二聚体 光修复酶可使二聚体解聚为单体状态，DNA完全恢 复正常。光修复酶的激活需300-600μm波长的光。 切除修复机制的基本过程是将受损的DNA片段切除，然后再以对侧链为模板，重新合成新链进行修复。 这是DNA的复制过程中所采用的一种有差错的修复方式。 修复时，利用重组蛋白RecA的核酸酶活性，将另一股健康亲链与损伤缺口相互交换。 RecA重组蛋白修复DNA示意图 第十二章 RNA的生物合成 (转录) 第一节 RNA转录合成的特点 能够转录RNA的那条DNA链称为模板链(template strand) ，也称作有意义链或Watson链或负链。 而与之互补的另一条DNA链称为编码链(coding strand)，也称为反义链或Crick链或正链。 RNA转录合成时，以DNA作为模板，在RNA聚合酶的催化下，连续合成一段RNA链，各条RNA链之间无需再进行连接。 特定起始点和特定终止点之间的DNA链构成一个转录单位，通常由转录区和有关的调节顺序构成。 第二节 RNA转录合成的过程 原核生物一个转录区段可视为一个转录单位，称为操纵子(operon)，包括若干个结构基因及其上游(upstream)的调控序列。 ?因子识别转录起始点，并促使核心酶结合形成全酶复合物。 转录开始时能与RNA全酶结合的DNA顺序（双链）称为启动子（promoter) 启动子序列通常由一些带共性的保守序列构成。 被RNA聚合酶辨认的区段就是位于转录起始点-35区的TTGACA序列。 酶与该区结合后，即滑动至-10区的TATAAT序列，并启动转录。 1. ?亚基脱落，RNA聚合酶核心酶变构，与模板结合松弛，沿着DNA模板前移； 2. 在核心酶作用下，NTP不断聚合，RNA链不断延长。 转录至模板某一位置 停止形成磷酸二酯键  RNA—DNA杂交链解开 DNA解链的部分重新形成双螺旋 RNA聚合酶离开DNA 不依赖ρ-因子的终止 DNA模板上有终止信号 转录出来的RNA RNA聚合酶遇此结构即停止工作。 DNA和RNA（dA：rU） 稳定性下降 GC富含和AT富含区的 回文结构 自身互补形成 发夹状结构（hairpin） 3’尾端有?4个U DNA恢复双链， 释放转录产物 依赖ρ-因子的终止 ρ-因子的结构及特点