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还原糖系滴定法
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.1? 方法原理
样品中的水溶性糖可以用80℃温水浸提,但对含淀粉和菊糖高的样品则须用800mL·L-1-850mL·L-1酒精浸提,其中还原糖可使费林(Fehling)试剂还原生成Cu2O沉淀,而本身被氧化和降解成糖酸。费林试剂是由CuSO4溶液、NaOH和KNaC4H4O6溶液组成。在碱性溶液中,酒石酸盐可与铜盐形成配离子而不致生成氢氧化铜沉淀。其反应如下:
Cu2++ 2OH- + 2(C4H4O6)2-→[Cu(C4H3O6)2]4-+2H2O
在煮沸条件下,用还原糖待测液滴定一定量的费林试剂时,铜的酒石酸配离子被还原糖还原,产生红色Cu2O沉淀,还原糖则被氧化和降解,其反应示意式如下:
?
上述反应是铜还原法测糖的基本原理。
滴定时是以亚甲基蓝为氧化还原指示剂,稍过量的还原糖可使蓝色的氧化型亚甲基蓝还原为
无色的还原型亚甲基蓝,即达滴定终点。
还原糖与费林试剂反应的完全程度与滴定时条件(如加热强度、温度、时间等)很有关系,故必须严格按照操作规程测定。指示剂也消耗一定量还原糖,所以每次滴定时须按规定加入相同数量的亚甲基蓝。本法适宜于含糖量高的样品(15—50mL糖液中含糖50mg)。
.2? 主要仪器高速组织捣碎机;电热恒温水浴锅;玻塞滴定管(附弯形尖管,见图15-1)
?
图15-1? 弯形尖管规格及安装图
1.玻塞滴定管? 2.橡皮圈? 3.橡皮管? 4.弯形尖管(管径为5mm)
.3? 试剂
(1) Soxhlet修正的费林(Fehling)溶液:应用前立刻配制,通过下列费林试剂A和B溶液等体积混合而制得。
①???? 费林试剂A:溶解CuSO4·5H2O 34.639g于水中,移入500mL容量瓶中,用水定容。
②???? 费林试剂B:溶解酒石酸钾钠(KNaC4H4O6·4H2O)173g和NaOH 50g于少量水中,洗入500mL容量瓶中,用水定容。
(2) 100g·L-1中性醋酸铅溶液:称100g醋酸铅[Pb(CH3COO)2·3H2O](化学纯)溶于水中,过滤后稀释至1L。
(3) Ba(OH)2饱和溶液:在100mL无CO2水中,加入固体Ba(OH)2·8H2O(化学纯)约6g,用玻棒搅拌,将烧杯盖好过夜,次日滤去未溶物,溶液装在细口瓶中备用。为了防止与空气中CO2接触,应装设碱石灰管及虹吸管。
(4) Na2SO4饱和溶液:称Na2SO4·10H2O(化学纯)165g,溶于1L水中。
(5) 50g·L-1硫酸锌溶液:称取ZnSO4·7H2O(化学纯)50g,加水溶解,并用水稀释至1L。
(6) 850mL·L-1及800mL·L-1乙醇(C2H5OH)溶液:取950mL·L-1乙醇(分析纯)85mL,加水稀释至95mL,即为850mL·L-1乙醇溶液。取950mL·L-1乙醇80mL,加水稀释至95mL,即为800mL·L-1乙醇溶液。
(7) 固体草酸钠(Na2C2O4
(8) 10g·L-1亚甲基蓝水溶液:称亚甲基蓝1.00g溶于水中,加水稀释至100m
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