第七章 分子发光荧光与磷光.pptVIP

第七章 一、荧光与磷光的产生过程luminescence process of molecular fluorescence phosphorescence 2.电子激发态的多重度 2.激发态→基态的能量传递途径(分子的去激过程) 非辐射能量传递过程 辐射能量传递过程 2. 分子的活化与去活化 分子的活化与去活化 镜像规则的解释 RLS 三. 金属螯合物的荧光 三、影响荧光强度的环境因素 4.内滤光作用和自吸现象 5.溶液荧光的猝灭 紫外-可见分光光度计测量池(吸收池) 一、基本原理 二、特点 三、装置与技术 习 题 解释系列名词: (1) 量子效率 ；(2) 振动弛豫 (3)系间跨跃 在UV-VIS范围内，从原理上比较分子荧光、磷光和化学发光的异同，并比较它们的吸收现象。 什么是荧光猝灭？举例说明怎么利用荧光猝灭来进行化学分析？ 在实际中，怎样区分荧光和磷光？ 比较荧光光谱法和化学发光光谱法的仪器特点。 荧光光谱法的灵敏度一般要比吸收光谱法的灵敏度高，试解释其原因。 通过下列方法能够改变荧光量子产率，并说明原因。 (1) 降低温度；(2) 升高温度 （3）改变荧光体的浓度 (4)加入动态猝灭剂 (5) 加入静态焠灭剂　　(6)改变溶剂的黏度 试说明为了获得荧光的: (1)　激发光谱；(2) 发射光谱；(3) 同步荧光光谱；(4) 三维荧光光谱，在实验上有哪些差别？ 为什么在高浓度条件下分子荧光校准曲线会变成非线性？ b.硫化物 挥发性硫化物SO2 、H2S 、CH3SH、 CH3SCH3等在富氢火焰中燃烧，产生很强的化学发光（蓝色）： SO2 + 2H2 → S + 2H2O S + S → 2S2 * S2 * → S2 + h? 发射光谱范围：350～460nm； 最大发射波长：394nm； 灵敏度： 0.2 ng/cm-3； 发射光强度与硫化物浓度的平方成正比。 （3）液相中的化学发光反应 机理研究较多，在分析中应用最多；可测痕量的H2O2 、Cu、Mn、Co、V、Fe、Cr、Ce、Hg、Th等。 应用最多的发光试剂：鲁米诺（3-氨基苯二甲酰肼）； 化学发光反应效率：0.15～0. 05； 鲁米诺在碱性溶液中与双氧水的反应过程： 该发光反应速度慢，某些金属离子可催化反应；利用这一现象可测定这些金属离子。 5. 化学与生物发光分析的应用 （1） 该发光反应速度慢，某些金属离子可催化反应；利用这一现象可间接测定这些金属离子。可测痕量的Cu2+ 、Mn2+、Co2+、V4+、Fe2+、 Fe3+、 Ni2+、Ag+、Au3+、Hg2+等 （2） 可检测低至 10-9 mol/L 的H2O2； （3） 间接测定某些生物试样 氨基酸 + O2 ????? 酮酸 +NH3 + H2O2 氨基酸氧化酶 葡萄糖 + O2 + H2O ????? 葡萄糖酸 + H2O2 通过测定生成的H2O2 ，确定氨基酸、葡萄糖含量。 葡萄糖氧化酶 草酸二酯(能量提供体)+高浓度双氧水+稠环芳烃(能量接受体)+金属离子+溶剂组成的反应体系，可发出很强的可见光，发光效率高，使用不同的稠环芳烃，发射出不同颜色的光(冷光源)。 生物发光分析应用 1 在pH 7～8；荧光素酶(E)和Mg2+的存在下，荧光素(LH2)与磷酸三腺甙(ATP)的反应，生成磷酸腺甙(AMP)荧光素和荧光素酸的复合物和镁的焦磷酸盐(ppi)： ATP + LH2 + E + Mg2+ ????AMP· LH2 · E +Mg ppi + 2H+ pH7 - 8 复合物与氧反应，产生化学发光： AMP· LH2 · E + O2 ???[氧化荧光素]* + AMP+CO2 + H2O [氧化荧光素]* ??? 氧化荧光素 + h? 最大发射波长562nm； 生物发光分析应用 2 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)在细菌中的黄素酶作用下，在氧化型黄素单核苷酸(FMA)存在下，发生发光反应 ： NADH + FMA + H+ ?????? NAD+ + FMNH2 NADH脱氢酶 FMNH2 + RCHO + O2 ???? FMN + RCOOH + H2O + h? 黄素酶 最大发射波长495 nm； 1. 灵敏度极高 例：荧光素酶和磷酸三腺甙(ATP)的化学发光