代谢调控育值种袁丽红.pptVIP

第五节 微生物代谢控制育种 技术背景 1956年谷氨酸发酵成功，标志发酵工业进入代谢控制发酵时期 代谢控制发酵时期的核心－－代谢控制发酵技术 代谢控制发酵过程 大体上可分为： 以生物化学和遗传学为基础，研究代谢产物的合成途径和代谢调控机制 选择巧妙的技术路线，通过遗传育种技术获得解除或绕过微生物正常代谢途径的突变株，从而使所需产物有选择性地大量合成和积累 代谢控制发酵的关键 微生物代谢调控机制能否被解除 能否打破微生物正常的代谢调节 能否人为控制微生物代谢 实现代谢控制发酵的手段 代谢调控育种－内因改变－主要技术支柱 发酵过程的代谢调控培养－外因改变 代谢调控育种特点 减少盲目性 定向选育 代谢调控育种应用及成果 氨基酸发酵 核苷酸发酵 一些次生代谢产物 一、正常微生物代谢调节与控制－自我调节 微生物有着一套可塑性极强和极精确的代谢调节系统，以保证上千种酶能正确无误、有条不紊地进行极其复杂的新陈代谢反应。 正常的微生物代谢调控方式 调节细胞膜对营养物质的渗透性 通过酶的定位控制酶与底物的接触 控制代谢物流向－－最主要的调节 通过酶的定位控制酶与底物的接触 酶合成的诱导－乳糖操纵子 酶合成的阻遏 分解代谢物阻遏 产物阻遏－色氨酸操纵子 lac 操纵子的正调控—分解代谢物阻遏 调节现有酶的催化活力－酶活性的调节 是以酶分子的结构为基础，在酶分子水平上的一种代谢调节。是通过改变现成的酶分子活性来调节新陈代谢的速率的方式。 同功酶调节——isoenzyme 意义：在一个分支代谢途径中，如果在分支点以前的一个较早的反应是由几个同功酶催化时，则分支代谢的几个最终产物往往分别对这几个同功酶发生抑制作用。—某一产物过量仅抑制相应酶活，对其他产物没影响。 例：大肠杆菌的天冬氨酸族氨基酸合成的调节 天冬氨酸族（谷氨酸棒杆菌） 天冬氨酸 E,R 4-磷酸天冬氨酸 E 天冬氨酸半醛 E,R E 二氢吡啶二羧酸 同型丝氨酸 同型丝氨酸磷酸 E,R R O-琥珀酰同型丝氨酸 苏氨酸 E,R 六氢吡啶二羧酸 胱硫醚 2-酮丁酸 R 二氨基庚二酸 同型半胱氨酸 R 赖氨酸 甲硫氨酸 异亮氨酸 酶活性调节机制之一：变构调节 变构酶理论 ： 变构酶是一种变构蛋白，具有两个或两个以上的立体专一性不同的接受部位，其中之一与底物结合并具有催化活性，称为活性中心；另一部位可与效应物结合的变构部位，称为调节中心。效应物的结合改变酶的立体构象，并导致酶活性的变化。 酶活性调节机制之二：酶的共价修饰 共价修饰（covalent modification）：指在专一性酶的催化下，某些小分子基团共价地结合到被修饰的酶分子上，使被修饰酶的活性发生改变，从而调节酶活性。 共价修饰调节酶：即通过共价修饰调节活性的酶叫共价修饰调节 酶。 共价修饰的类型： 磷酸化/去磷酸化（主要存在于高等动、植物细胞中） 腺苷酰化/去腺苷酰化；（主要存在细菌中） 乙酰化/去乙酰化；尿苷酰化/去尿苷酰化； 甲基化/去甲基化；S-S/SH 酶活性调节机制之二：酶的聚合与解聚 二、代谢调控育种技术在发酵工业中的应用 代谢调控育种技术：就是通过定向选育某种特定的突变型达到大量积累目的产物的目的。 应用： 初级代谢产物生产菌：几乎全部氨基酸、多种核苷酸 次级代谢产物生产菌：抗生素 酶生产菌： 代谢调控育种技术设计思想 通过特定突变型的选育，达到： 改变代谢通路 降低支路代谢终产物的产生 切断支路代谢途径 提高细胞膜的透性 最终使代谢流向目的产物积累方向 代谢调控育种措施 （三）控制细胞膜渗透性 10、营养缺陷型突变株的选育 生物素缺陷型 油酸缺陷型 甘油缺陷型 11、温度敏感突变株 细胞膜渗透性 3、营养缺陷型突变株的选育 4、渗漏型缺陷型突变株的选育 5、回复突变株的选育 6、耐自身代谢产物的突变株的选育 7、抗终产物结构类似物的突变株的选育 8、耐前体突变株的选育 9、条件突变株的选育 反馈阻遏 反馈抑制 1、组成型突变株的选育 2、抗分解调节突变株的选育 解除碳源分解调节突变株的选育 解除氮源分解调节突变株的选育 解除磷酸盐调节突变株的选育 诱导 分解阻遏 分解抑制 育种措施 调节方式 直线式代谢途径：选育营养缺陷性突变株只能积累中间代谢产物 A a B b C c D d E