人类精原干细胞体义外培养初步研究-生殖工程专业毕业论文.pdf.docxVIP

博十学位论文 博十学位论文 中文摘要 摘 要 精原干细ffl蔓(Spermatogonial stem cells)是男性生殖细胞系中特有 的一种干细胞。它不仅能自我复制形成新的精原干细胞，而且还能通 过减数分裂的方式分化为终末端细胞精子。因此，精原干细胞对于维 持睾丸内干细胞池的稳定和生精过程的持续具有重要的作用。然而， 人类精原干细胞的体外培养建系研究却鲜有进展。 目的：本研究是主要目的是探索一种适合人精原干细胞生存和扩 增的体外培养体系，为研究生殖干细胞的发育过程建立良好的实验平 厶 口。 方法：本实验主要采用不同种类的饲养层细胞和性激素以及细胞 因子联合作用构建体外培养体系。从人类胚胎和成熟睾丸组织中分离 精原干细胞，接种在不同密度的人成纤维细胞饲养层和小鼠成纤维细 胞饲养层上进行培养，筛选出最合适的支持细胞体系。在此基础上， 分别添加不同浓度的性激素例如睾酮(Testosterone)和雌激素 (Estrogen)及多种的细胞因子例如干细胞因子(SCF)，胶质细胞营 养因子(GDNF)，碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)矛11白血病抑制因子 (LIF)及碱性成纤维细胞生长因子加白血病抑制因子(bFGF+LIF)组合 以检测其是否对精原干细胞具有促进增殖的作用。在培养过程中，应 用5．溴，2’一脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)整合实验和原位凋亡检测实验 (TUNEL)筛选出最佳