醋酸纤维网薄膜电泳分离血清蛋白质并定量.pptVIP

目的 学习醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白质的原理和方法 学习蛋白质染色的方法 了解电泳法分离血清蛋白质的临床意义 原 理 1、电泳（electrophoresis）法 在外电场的作用下，带电颗粒，例如不处于等电状态的蛋白质分子带电荷的蛋白质，在电场中将向着与其所带电荷电性相反的电极泳动这种现象称为电泳。 电泳影响因素 蛋白质在电场中移动的速度取决于蛋白质所带的电荷性质、数量及质点的大小和形状；此外还受外界因素的影响如，电场强度、溶液的PH、离子强度及电渗等。 常见的有： 醋酸纤维膜电泳、 聚丙烯酰胺凝胶电泳、 毛细管电泳 醋酸纤维薄膜电泳 醋酸纤维薄膜作为支持介质 醋酸纤维薄膜：将纤维素的羟基乙酰化为醋酸酯，溶于丙酮后制成有均一细密微孔的薄膜，其厚度为0.1～0.15mm 血浆蛋白： (1)清蛋白（Alb）、α1、α2、β、纤维蛋白原和γ-球蛋白 ; (2)血浆中蛋白质的PI小于7.0，在PH8.6 Buffer中解离成负离子，在电场中向正极移动。 (3)在同一pH下所带电荷量多少有差异，各蛋白质的分子大小与分子形状也不相同，因而在同一电场中泳动速度不同 。 染色剂  一般蛋白质染色常使用氨基黑、考马斯亮蓝、丽春红 糖蛋白用甲苯胺蓝或过碘酸-Schiff试剂 脂蛋白则用苏丹黑或品红亚硫酸染色 白蛋白 a1-球蛋白 a2-球蛋白 β-球蛋白