gm试验原理操作及应用(推广课件).pptxVIP

GM试验的原理、 操作及应用;目 录;曲霉菌; 侵袭性曲霉患者在血液科和ICU最为常见;Teutsch, et al. Clin Infect Dis. 2001, 32: 358;不同诊治情况下侵袭性曲霉感染的死亡率;IFD诊断延迟时间与死亡率的关系; 临床及影像学表现 病原学证据 无菌部位培养阳性 （培养和非培养方法） 组织病理学阳性 ? ? ? 高危患者 ? 拟诊 ? 临床诊断 ? 确诊 ? ? ? ? 预防用药 经验性治疗 抢先治疗 靶向治疗 深部真菌病诊断与治疗策略 ;曲霉菌的实验室检测方法;GM试验被列入真菌诊断和治疗的指南; GM实验在欧洲已用了十多年， 2003年经FDA认可在美国使用。 有2/3的血液肿瘤患者在其他诊断方法阳性之前6-14d（平均8天）即可检测到GM 抗原【1】 。适于侵袭性曲霉感染的早期诊断。 【1】 Maertens J, Van-Eldere J, Verhagen J, et al. Use of circulating galactomannan screening for early diagnosis of invasive aspergillosis in allogeneic stem cell traspants. J Infect Dis,2002,186(9):1297-1306 ;GM 试验阳性是侵袭性曲霉菌感染诊断标准中重要的微生物学依据 可实现侵袭性曲霉菌感染的早期诊断 可实现对高危人群曲霉菌感染的动态监测 可对抗真菌治疗提供用药依据和进行药效学评价;侵袭性真菌感染的诊断标准;早期诊断;为临床用药提供依据;2012年卫生部对抗菌药物分级管理政策;评价疗效和病情监测;不同患者BG(●) and GM(?)体液变化情况;GM试验原理及使用方法; 半乳甘露聚糖（Galactomannan，简写GM）是曲霉菌细胞壁上的一种多聚抗原，其包含了甘露糖骨干与半乳糖旁基的多糖，更准确的一点来说，是直线状（1-4）-β-D型甘露糖骨架于它们6-连接点连接到α-D型半乳糖的多糖，即1-6-连结的α-D型吡喃半乳糖。;曲霉菌半乳甘露聚糖抗原检测（GM试验）;一、酶联免疫吸附测定(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA)技术是以抗原、抗体的特异性结合反应为基础，将抗原或抗体的检???与酶对底物的高效催化作用结合起来的一种敏感性很高的免疫检测技术。 二、按反应方式的不同，ELISA实验的方法分多种。本次推出的真菌抗原和抗体检测产品分别采用了竞争法和间接法。 三、ELISA试验的操作过程由样本处理、加样、孵育、洗涤、显色、终止等几个基本环节组成。各环节的具体要求因产品而异。 ;本公司使用竞争ELISA法，其原理是标本中的抗原和酶标板上包被的固相抗原均与试剂中半乳甘露聚糖抗体结合。标本中抗原量含量愈多，与试剂中半乳甘露聚糖抗体结合越多，剩余的抗体与包被抗原结合的越少，抗原抗体结合物与酶标抗体结合的越少，最后的显色也愈浅。 标本和试剂反应后所产生的OD值与标本中待测定的GM含量成反比关系。 通过标准曲线，便可以从反应显色的OD值上计算出待测标本中GM的含量。 ;曲霉菌半乳甘露聚糖检测（GM试验） 试剂盒使用方法;开展GM实验需具备的基本条件;GM试验必需仪器设备 1.酶标仪：必须能使用450nm波长用于检测。 2. 高速离心机：必须达到10,000g离心力以上，一般迷你离心机达不到这个离心力的要求。如果离心机不能制冷，可在样本经沸水浴处理之后室温冷却15min再离心。 3. 37℃恒温培养箱（或其他可替代的恒温空气浴设备）：必须设置温度为37℃，其他温度（如35℃）不可以使用，否则会影响检测值，同时要保证恒温箱的洁净。 4. 沸水浴：一般的电磁炉或者其他可以保证沸水浴的设备皆可，但暂不推荐