微生物检验实验室基本要求知识点.doc

病毒是一类体积微小、结构简单、具有严格的寄生于活细胞的微小生物，它们具有下列几种基本特征： 1、病毒的基本结构是由核酸（基因组）与蛋白质组成，由DNA或RNA组成核心，外有一蛋白外壳（核壳），有些病毒在核壳外面另有一层脂蛋白组成的包膜包围着。 2、病毒只在活细胞中增殖，因为病毒缺乏完整细胞器等必要装置，所以必须依赖宿主细胞提供高分子合成装置和能量。 3、病毒非常微小，无细胞结构，绝大多数不能用光学显微镜检查，而必须用电子显微镜才能察见。 核酸化学： DNA是脱氧核糖核酸的英文缩写。RNA与DNA差别在核糖2位带有一个羟基。 DNA ①DNA起储存遗传信息作用，并以核苷酸排列顺序形式储存遗传信息。 ②由4种核苷酸组成DNA分子，由碱基互补维持DNA双螺旋结构。 ③在动植物、细菌、真菌中都含有DNA，但在病毒中（非细胞型微生物）不一定含DNA。 ④DNA为长丝状分子互相纠缠，其溶液十分粘稠。 ⑤它对紫外线有最强的吸收，通常用260nm波长测DNA溶液浓度，它在近中性环境中带负电核，DNA变性后OD值会升高。 ⑥因DNA 不溶于乙醇，常用二倍量沉淀DNA ⑦在变性温度时，它的粘性突然降低。 ⑧ 淬火是为了保持DNA单链状态。DNA变性后溶液慢慢冷却，DNA会自动恢复双螺旋结构。 说法错误的： （1）DNA和RNA的化学结构碱基G与C通过2对氢键配对构成DNA分子说法错误的。 （2）与DNA分子相比，RNA分子难水解的看法也不对。 （3）许多质粒可在宿主之间进行转移的说法是不对的。 形状： （1）TRNA二级结构呈三草形。 （2）在细胞内RNA分子中rRNA占比例最大。 （3）DNA二级结构中呈左手双螺旋的是Z构象。 DNA结构、性质：在真菌中网崎片段一般为100～200核苷酸。噬菌体核酸最常见的是双链线状DNA。 反式作用因子具有的DNA识别或DNA结合域，主要有 螺旋/转折/螺旋（T/H/T）,锌指结构，碱性-亮氨酸拉链（bZIP），碱性-螺旋/环/螺旋（bH/L/H）。 真核生物中的瑞粒酶是由RNA和蛋白质构成的。一般真核生物染色体上有5种主要的组蛋白，其中亲和力最强的两种是H3 H4 。 DNA的复制和修复： （1）细胞每分裂一次，染色体DNA就合成一次，新DNA是按原DNA分子合成。 （2）DNA分子拆（ca）开成两条链，依每一条单链合成一条新单链，成为半保留复制。 （3）在合成DNA时限制性核酸内切酶不是合成DNA的必要条件。 （4）DNA多聚酶只能结合在一长段DNA单链的一小段局部双链结构上，才能顺利开始DNA合成。 （5）在DNA合成中单核苷酸分子必须顺序以共价链连接在已形成核酸链3，末端的羟基上。 （6）在合成发生错误时，DNA多聚酶会切除错误核苷酸，在那个位置上重新加一个正确核苷酸。 （7）在人工合成DNA时，只加一种或两种三磷酸单核苷酸，那么合成就会停止在缺失的核苷酸位置上。 在大肠菌DNA损伤修复时填补缺口最重要的酶是DNA聚合酶Ⅰ。DNA三个终止密码子分别是UAA、UAG、UGA。 在大肠菌中DNA复制最主要的DNA聚合酶是DNA聚合酶Ⅲ。该酶的核心聚合酶中，具有3， - 5，外切酶活性的亚基是逖腔￡ 在体内染色DNA复制时必须有RNA引物。在哺（bu）乳动物细胞中负责合成线粒体DNA是DNA聚合酶r。 RNA酶Tl可特异地作用于嘌呤核苷酸3，端磷酸并切割与相邻核苷酸相连的磷酸二酯键。 体内DNA复制与体外PCR不同的是引发酶参与。与体内DNA复制不相关酶是反转录酶。 在细胞内DNA合成正常进行是RecA蛋白，而RecA蛋白不具有蛋白酶活性。 在大肠菌DNA聚合酶Ⅰ klenow片段没有5‘ - 3‘外切酶活性。 DNA修复过程中尿嘧啶 糖基酶系统不包括Sl核酸酶。 在逆转录酶的RNAaseH活性是一般DNA聚合酶所不具备的。在逆转录酶的最终产物双链DNA的长度较正链RNA稍长。 转录： 在生物体内，RNA合成过程称为转录。它（RNA）是按照储存在DNA上遗传信息合成。合成RNA时DNA双链也要解旋，解旋部位称启动子。 去掉RNA分子5，末端的磷酸，不起合成酶功能的作用。在刺激点突变，改变某些基因功能与DNA向RNA转移无直接关系（？） （1）大肠菌的RNA聚合酶由5个亚基，其笱腔衅舳幼饔谩￡ （2）利福平作用该酶（聚合酶）庋腔稀￡ （3）RNA聚合酶Ⅰ主要是转录rRNA（构成核糖体骨架的是rRNA）。 Prt-mRNA内含子的5，- 末端一般是GU。 （4）RNA聚合酶Ⅱ主要是转录hnRNA。在真核基因启动子近侧序列元件中，对转录起点定位起关键作用的是TATA盒。 （5）放线菌素D能抑制DNA转录。编码核糖体RNA的基因是一种中度重复序列的DNA序列。 翻译： 在合成各种不同RNA中： （1