广东省人感染AH1N1流感病毒实验室检测技术指引.docVIP

广东省人感染A/H1N1流感病毒实验室检测技术指引 广东省疾病预防控制中心 （2009年5月2 2009年5月18日我省确诊了首例A/H1N1病毒感染患者。为有效排查新出现的人感染A/H1N1病毒病例，对感染A/H1N1流感病人做到“早发现、早诊断、早报告、早隔离、早治疗”，防止A/H1N1流感疫情扩散，特将5月7日制定下发的《实验室检测技术工作指引》进行修订。请我省应急和监测实验室网络各成员按照本指引开展当地疑似A/H1N1病毒感染患者的实验室排查工作。 1.实验室条件及生物安全要求 1.1 对采集自感染A/H1N1流感病毒疑似病例的临床标本进行的诊断性实验室工作，应在BSL2实验室内进行。所有样本操作均应在生物安全柜（BSC）内进行。采用三级个人防护（N95呼吸器或更高级别的防护装备，鞋套，前封式手术服，双层手套和眼部防护装备等）。 1.2对A/H1N1流感病毒核酸检测阳性的标本，若进行病毒分离和病毒的血清学鉴定必须在三级生物安全实验室里操作。 1.3废弃物的处理应严格遵循所在机构标准实验室操作规程内载明的所有废弃物处置程序。 1.4 标本储存、包装和运送应按照《病原微生物实验室生物安全管理条例》（国务院424号令）和《可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输管理规定》（中华人民共和国卫生部第45号令）等有关规定执行。 1.5 所有参与人感染A/H1N1病毒检测的实验人员均应进行健康监测。一旦发现有流感样症状，如 ：突然发热、流涕、咳嗽、咽痛、头痛、腹泻和肌肉疼痛等症状，无法诊断为其他疾病，应立即向实验室负责人报告，并采取相应的控制措施。 1.6 实验室人员要严格按照中华人民共和国国家标准（19489-2008）《实验室生物安全通用要求》，以及卫生部《人间传染的病原微生物名录》和《临床基因扩增检验实验室管理暂行办法》的有关规定开展实验室检测。 2.标本的采集 2.1标本采集人员：医疗机构的医生、护士或当地疾病预防控制中心流行病学专业人员负责标本采集。 2.2 采样对象：A/H1N1流感病毒感染疑似病例、临床诊断病例以及其它需要进行A/H1N1病毒实验室排查者。 2.3 标本种类及要求：病人咽拭子、鼻拭子、鼻咽拭子、鼻咽吸出液、气管吸取物、肺活检物、肺和气管组织、急性期和恢复期血清等均可以用于A/H1N1实验室诊断检测。对疑似A/H1N1感染死亡病例，征得患者家属同意可采集肺、气管、心、肝、脾、肾和淋巴结等组织，并做好标本的冷藏。 2.4采集方法 2.4.1咽喉拭子:用拭子在病人的两侧扁桃体和后咽部用适当的力量擦拭，采集的拭子放置在含有2～3 ml病毒运输液的塑料管中，折断拭子的柄部后旋紧。 2.4.2鼻拭子：使用头部为合成聚酯纤维的拭子，轻轻推送至上腭，轻轻旋转擦拭，然后旋转慢慢退出。用同一个拭子可以采集两个鼻腔. 拭子的头部要放进含有2～3 ml病毒运输液的塑料管中，折断拭子的柄部后旋紧。 2.4.3鼻咽拭子:使用头部为合成聚酯纤维的可弯曲的拭子由鼻腔插入鼻咽处，轻轻旋转擦拭，然后旋转着慢慢退出；也可使用同一拭子从另一个鼻孔插入采样，采集完毕应将拭子的头部放进含有2～3 ml病毒运输液的塑料管中，折断拭子的柄部后旋紧。 2.4.4鼻咽吸出液:用一根连接有样本收集管和真空器的导管吸取鼻咽分泌物，导管轻轻插入鼻孔，并平行推送至上腭处，打开真空伐，同时慢慢旋转着退出。另一侧鼻咽吸出液用同一个导管、同样的方法采集。 采集完标本后，导管要用3 ml 的病毒运输液冲洗。 2.4.5血液标本: 采集急性期全血标本3～5ml, 尽可能在发病早期（3天内）采集，不要迟于发病后7天。恢复期血液标本要在发病14天后采集。 3. 标本包装、保存、运送与接收 3.1 标本的包装 标本必须放在密封的带螺旋盖的塑料管里，直接在塑料管上用油性记号笔写明样本的种类、编号，然后放入塑料袋密封，每袋装一份标本；同时将标本有关信息填入标本送检登记表。标本运输应使用A类包装，必须达到标准的三层包装要求，所有包装容器必须标有生物危害标识。 3.2 标本保存 所有标本在运输过程中应冷藏，标本收集后应24小时内送检。实验室收到标本后应立即进行分装处理，一式三份，其中保存两份以备进一步复核检测。采集的标本若不能在24～48小时送检，应在－70 ℃保存。 3.3 标本的运送 标本从采集现场运送到实验室，以及网络实验室之间运送标本，应在冷藏条件下用专车运送，并有专人护送。 3.4 标本的接收 各实验室应公布标本接收联系方式，运送标本的单位送样前应通知接收单位，并获得接收单位的同意，同时将拟运送标本的信息报告当地卫生行政部门。接收单位接到标本后也应及时向同级卫生行政部门报告。 4. 检测方法 4.1 4.1.1依据国家推荐的