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CRISPR/Cas 9系统的优势 操作简单，靶向精确性更高。sgRNA靶向序列和基因组序列必须完全匹配，Cas9才会对DNA进行剪切。编码sgRNA 的序列不超过100bp，因此比构建TALENs和ZENs更简单方便，用于CRISPR的sgRNA识别序列仅需20个核苷酸。 CRISPR/Cas9系统是由RNA调控的对DNA的修饰，其基因修饰可遗传。 基因修饰率高，CRISPRs基因敲入的效率为51%-79%，TALENs的效率为0%-34%。 基因调控方式多样，例如敲除、插入、抑制、激活等 无物种限制,可实现对靶基因多个位点同时敲除。 实验周期短，最快仅需2个月，节省大量时间和成本。(ZFNS一个靶点成本6000＄) CRISPR/Cas 9系统的评价 参考文献： [1] Y. Ishino, H. Shinagawa, K. Makino, M. Amemura, A. Nakata, Nucleotide sequence of the iap gene, responsible for alkaline phosphatase isozyme conversion in Escherichia coli, and identification of the gene product. Journal of bacteriology 169, 5429-5433 (1987). [2] R. Jansen, J. D. A. v. Embden, W. Gaastra, L. M. Schouls, Identification of genes that are associated with DNA repeats in prokaryotes. Molecular microbiology 43, 1565-1575 (2002). [3]方锐,畅飞,孙照霖,李宁,孟庆勇. CRISPR/Cas9介导的基因组定点编辑技术[J]. 生物化学与生物物理进展,2013,08:691-702. [4]李君,张毅,陈坤玲,单奇伟,王延鹏,梁振,高彩霞. CRISPR/Cas系统:RNA靶向的基因组定向编辑新技术[J]. 遗传,2013,11:1265-1273. [5]沈彬. 利用CRISPR/Cas9进行基因编辑[D].南京大学,2014. 谢谢欣赏 欢迎批评指正 基因组编辑技术 姓名： 学号： 自从证明DNA是遗传物质以后，人类就开始了通过改变DNA来改造生物体生理机理和功能的尝试。 1973年，斯坦利·N·科恩(Stanley N. Cohen)和赫伯特·W·博耶(Herbert W. Boyer) 成功将蛙的DNA插入到细菌中。 20世纪70年代，基因泰克(Genetech)公司对大肠杆菌进行基因改造，使其带有一个人源基因(这个基因是人工合成的)，最后生产出治疗糖尿病的胰岛素。 1974年，，加利福尼亚州索克生物研究所(Salk Institute for Biological Studies)的Rudolf Jaenisch通过将SV40 病毒的DNA注射到小鼠的囊胚中,培育出了第一只转基因小鼠。 基因突变技术：物理诱变、化学诱变… 转基因技术：T-DNA插入 RNA干扰技术：dsRNA、Artificial miRNA 核外遗传技术：质粒、人工染色体 同源重组技术：e.g. 传统的基因敲除小鼠 无法控制突变位点 不能精确控制外源基因插入位点 对靶基因抑制不彻底、不特异 难以稳定的遗传 费时费力费钱，难以大量应用 并引起一系列生物伦理的问题… 现 状 基因组编辑技术 基因组编辑技术（genome editing）是一种可以在基因组水平上对DNA序列进行改造的遗传操作技术。也称为基因打靶（Gene targeting）。 技术的原理是构建一个人工内切酶，在预定的基因组位置切断DNA，切断的DNA在被细胞内的DNA修复系统修复过程中会产生突变，从而达到定点改造基因组的目的。 历史 1993年前ZFN就已开始出现，迄今已发展了20多年才有今天的成就； 2009年底出现的TALEN似乎一夜之间呈现出取代ZFN的架势； 2012年底CRISPR/Cas已显现出取代TALEN的巨大潜力，在2013年成为现实。 荣誉 2011年：ZFN， TALEN和Meganuclease—2011年度方法（Nature Methods） 2012年：TALEN — 2012年十大突破（Science） 2013年：CRISPR/Cas被认为是诺贝尔奖级别的成果，华人科学家张峰已因此获得生物医学大奖。 基因组编辑技术 应用 基因组巡航