化合物h057镇静催眠作用机制研究-药理学专业论文.docxVIP

THESIS THESIS FOR M．S．DEGREE Chinese Academy of Medical SciencesPeking Union Medical College 摘要 本科室与北京协和医学院药物研究所药化室张纯贞研究员课题组合作，从一 系列哌嗪类化合物中定向筛选出化合物H057，其结构新颖且具有较强的镇静催 眠作用。本论文旨在对H057的镇静催眠作用进行药效学评价，并对其机制进行 初步探索。 腹腔注射H057(芝5 mg／kg)5 min后，即可观察到小鼠出现明显的镇静现象。 给药15 min后，利用开场实验测定小鼠自主活动。结果表明，H057(5和25 mg／kg， i．p．)能显著抑制小鼠的自主活动，抑制率分别为25％和66％。腹腔注射H057 Q60 mg／kg、能直接诱导100％小鼠翻正反射消失，60 mg／kg和80 mg／kg组小鼠睡眠 潜伏期分别为(24+11)min和(204．7)min，睡眠时间分别为(96+15)min和 (1244-64)min。协同阈下剂量戊巴比妥钠实验结果显示，H057能显著增加阈下剂 量戊巴比妥钠诱导小鼠的入睡率，5 mg／kg和25 mg／kg组小鼠的入睡率分别增加 为87．5％和100％。同时，直接经侧脑室给予H057(20峙，l min／只)，也能引起 小鼠翻正反射消失，显示H057能够以原型起效。以上实验结果表明H057具有 显著的镇静催眠作用。通过悬挂实验测试H057对小鼠肌张力的影响，结果发现 给药40 min后，溶剂对照组小鼠全部能悬挂于绳上超过l min，10 mg／kg和20 mg／kg组小鼠只有1／2能悬挂于绳上超过1 min。测定给予H057前后不同时间点 小鼠的肛温，结果显示H057(5和10 mg／kg，i．p．)能分别引起小鼠体温下降0．9。C 和1．8。C。摄食实验结果显示，H057(25 mg／kg，i．p．)给药16小时内对小鼠摄食 的抑制率为26％。 通过合并给予GABAA受体拮抗剂荷包牡丹碱，测定小鼠自主活动以检测荷 包牡丹碱对H057镇静作用的影响。实验结果表明，荷包牡丹碱不能拮抗H057 对小鼠自主活动的抑制作用。利用印防己毒素、戊四唑和NMDA诱导小鼠致惊 厥模型，来评价H057对小鼠惊厥潜伏期的影响。实验结果显示，H057(20mg／kg， i．p．)对印防己毒素和NMDA诱导小鼠惊厥的潜伏期有显著延长作用，惊厥潜伏 期分别延长51％和500％。采用高效液相．电化学检测法测定H057对小鼠大脑皮 层、纹状体、下丘脑和海马脑匀浆中抑制性氨基酸GABA含量的影响。结果表 明，H057对不同脑区脑匀浆中GABA含量无显著影响。应用微透析技术在体动 态监测H057对大鼠大脑皮层细胞外液GABA含量的影响。实验结果显示H057 能显著升高大脑皮层细胞外液GABA水平，给药后l 0 min升高26％。采用离体 孵育脑片的方法测定H057对小鼠大脑皮层和下丘脑细胞外液GABA含量的影响。 万方数据 THESIS THESIS FOR M．S．DEGREE ChineseAcademy ofMedical SciencesPeking Union Medical College 结果显示H057(106 moL／L)能显著升高下丘脑和大脑皮层细胞外液GABA水 平，分别升高了160％和130％。 前期研究发现H057能显著抑制小鼠的摄食，因此，我们推测H057发挥镇 静催眠作用可能跟Orexin能神经系统相关。通过评价侧脑室注射Orexin受体激 动剂Orexin A对H057(80 mg／kg，i．p．)诱导小鼠睡眠时间的影响，我们发现侧 脑室注射Orexin A(0．10、0．15和0．20 nmol，i．c．V．．)能剂量依赖性的缩短H057 诱导小鼠的睡眠持续时间，各剂量组的缩短率为37％、55％和95％。同时，我们 发现H057(80 mg／kg，i．p．)不能引起预先侧脑室注射OrexinA的小鼠翻正反射 消失。以上两个实验结果提示H057可能是Orexin受体的拮抗剂。Orexin主要通 过激活单胺能神经系统来促进觉醒。采用高效液相．电化学检测法测定H057对小 鼠大脑皮层、纹状体、下丘脑和海马脑匀浆中单胺神经递质含量的影响。结果表 明，H057能显著降低小鼠纹状体内DA和下丘脑内NE的含量，分别降低了43％ 和28％。应用微透析技术在体实时动态监测H057对大鼠大脑皮层细胞外液单胺 神经递质含量的影响。结果显示H057能显著降低大鼠大脑皮层细胞外液的NE 和5-HT水平，分别降低38％和50％。采用离体孵育脑片的方法测定H057对小 鼠大脑皮层和下丘脑细胞外液单胺神经递质含量的影响。实验结果表明