实验四酵母核糖核酸的分离与们组分鉴定.pptVIP

实 验 四 酵母核糖核酸的分离与组分鉴定（P159） 掌握分离核糖核酸的一般原理及操作方法 了解核酸的组分，掌握鉴定核酸组分的方法 【原理】 酵母核酸中RNA含量较多； 一般提取的RNA主要是rRNA，与蛋白结合在一起形成核糖核蛋白（RNP）； RNA溶解性：溶于水，溶于稀酸、稀碱溶液，不溶于乙醇、乙醚和氯仿等一般的有机溶剂； RNA的等电点在2.0-2.5，DNA的等电点在4.2左右； 碱提法、盐提法 在碱提取液中加入酸性乙醇溶液可以使解聚的核糖核酸沉淀，由此得到RNA的粗制品。 【试剂和器材】 器材 研钵 刻度试管、普通试管 刻度离心管 搅拌棒 量筒、移液管、滴管 恒温水浴锅 台式离心机 【试剂和器材】 试剂 酵母片 0.04mol/LNaOH溶液 1.5mol/LH2SO4溶液 冰醋酸 浓氨水 【实验方法】 （一）RNA的提取 RNA粗制品+ 5mL1.5mol/LH2SO4，沸水浴加热10min，制成水解液。 组分鉴定 嘌呤碱：1mL水解液+5滴浓氨水+ 1mL0.1mol/L AgNO3，观察有无白色絮状嘌呤银化物沉淀。 核糖：1mL水解液+2mLFeCl3-HCl+0.2mL苔黑酚乙醇，沸水浴3min，观察溶液有无墨绿色出现。 磷酸：1mL水解液+1mL定磷试剂，沸水浴3min，观察溶液中有无蓝色沉淀生成。 说明各试管中现象 解释原因 得出结论 RNA提取实验过程中各操作步骤的作用是什么？ 心得 * * 【目的】 核糖核酸含有核糖、碱基（嘌呤碱、嘧啶碱）和磷酸各组分。 加硫酸煮沸可使其水解，从水解液中可以测出上述组分的存在。 磷酸+钼酸铵 → 磷钼酸铵↓ 核糖+地衣酚试剂→ 墨绿色化合物 嘌呤碱+硝酸银→ 嘌呤银化物（白色） 【原理】 95%乙醇 0.1mol/LAgNO3溶液 三氯化铁浓盐酸溶液 苔黑酚乙醇溶液 定磷试剂 3片干酵母片 于研钵中充分研磨 放入刻度试管 加0.04mol/LNaOH 10mL 沸水浴加热30min(搅拌) 取出加乙酸4滴，使提取液呈酸性 2500rpm,离心15min,弃沉淀 取上清加入等体积95%乙醇，边加边搅拌 静置5min 2500rpm,离心5min,弃上清 沉淀即为RNA粗制品 （二）RNA的组分鉴定 【实验方法】 【结果与分析】 【讨论与心得】