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第十四章 革兰阳性球菌 第一节 葡萄球菌属 在自然界广泛分布。 存在于人和动物的皮肤黏膜上的菌株 可致多种化脓性感染 疖、痈、脓肿、菌血症等 烫伤样皮肤综合症 毒性休克综合症 二、临床意义 凝固酶阴性葡萄球菌（CoNS）所致疾病 1、CoNS是人体皮肤黏膜正常菌群之一，是医院感染的主要病原菌。 2、表皮葡萄球菌：人工瓣膜性心内膜炎、静脉导管感染、腹膜透析性腹膜炎、血管移植物感染和人工关节感染等。 3、腐生葡萄球菌：女性尿路感染的重要病原菌。 3.生化反应和抗原构造 4.抵抗力 对外界因素的抵抗力强于其他无芽胞菌。 干燥脓汁、痰液中可存活2~3个月。 耐盐性强，能在10%~15%NaCl培养基中生长。 易产生耐药性，对青霉素G的耐药性已达90%以上，尤其是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌MRSA已经成为医院内感染最常见的致病菌。 病原性葡萄球菌一般分布在人的皮肤和鼻咽部，带菌率达20%~50%，医务人员带菌率达70%，是医院内交叉感染的重要传染源。 （一）标本采集 根据感染的部位，采集不同的标本。 该属细菌广泛分布在人体皮肤和黏膜，采取时避免病灶周围正常菌群污染。 （三）标本直接检查 无菌体液如脑脊液和穿刺液可直接涂片、革兰染色后直接显微镜检查，查见细菌具有重要临床价值。 其他体液标本如同时伴有炎性细胞时则直接显微镜检查结果也具有参考价值。 涂片检查发现有形态相似的革兰阳性球菌，则可初步报告“查见类似葡萄球菌属革兰阳性球菌”，并进一步进行分离和鉴定予以证实。 （四）分离培养与鉴定 1.菌落与菌体形态 金黄色葡萄球菌 直径6~8mn，金黄色或橙色，菌落周围出现或不出现透明溶血环 表皮葡萄球菌 直径为5~6mm，某些产粘液菌株能粘附在琼脂平板表面，无色或白色 溶血葡萄球菌 直径5~9mm，不透明，无色素或奶油色、黄色 里昂葡萄球菌 直径4~7mm，边缘整齐稍扁，奶色、黄色和沃氏葡萄球菌相似 腐生葡萄球菌 直径5~8mm，白色或柠檬色 注意：菌落外观疑为葡萄球菌者应进行革兰染色证实，甘露醇高盐平板上金黄色葡萄球菌菌落为黄色。 2．凝固酶试验 3．耐热核酸酶试验 大多数金黄色葡萄球菌、施氏葡萄球菌、中间葡萄球菌、猪葡萄球菌能产生耐热核酸酶。 表皮葡萄球菌、模仿葡萄球菌、肉葡萄球菌含微弱耐热核酸酶。 4．磷酸酶试验 大多数的表皮葡萄球菌和金黄色葡萄球菌、施氏葡萄球菌、中间葡萄球菌和猪葡萄球菌为阳性。 将待测菌种点种在加有硝基酚磷酸盐的pH5.6~6.8 MH琼脂上，孵育18~24h，菌落周围出现黄色为阳性。 耐甲氧西林葡萄球菌 定义： 凡对甲氧西林、苯唑西林、头孢西丁耐药，或PBP2a阳性、mecA基因阳性的葡萄球菌定义为耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）。 传统分类 1.形态染色 2．培养特性 兼性厌氧菌 营养要求高 血平板α、β、γ三种特征性溶血现象 肺炎链球菌 荚膜多糖使菌落呈粘液状 产生自溶酶，培养48h后出现“脐窝状”菌落。 3．生化特性和抗原构造 发酵葡萄糖和多种糖，不产气，乳酸为代谢终末产物，触酶阴性 （二）标本采集 咽拭子、痰液、脓汁和血液等标本采集后在2h内运送到实验室，立即进行检查和接种。 对B群溶血链球菌的检查，用无菌棉签采集第35周~37周妊娠妇女的阴道分泌物，置于含多粘菌素(10μg/ml)和萘啶酸(15μg/ml)选择性培养肉汤中孵育18~24h，再作分离培养。 （三）标本直接检查 直接显微镜检查 标本涂片、革兰染色、显微镜检查见链状排列革兰阳性球菌有助于无正常菌群污染标本的诊断 荚膜肿胀试验用于检查肺炎链球菌 直接检测抗原 咽拭标本的A群链球菌和女性生殖道标本的B群链球菌可用抗原检测 （四）分离培养与鉴定 用羊血琼脂平板培养初代分离需用5%CO2环境，35~37℃孵育24h。 观察菌落性状：溶血现象及菌落大小。 革兰染色为革兰阳性球菌，链状或短链状排列，触酶试验阴性，6.5%NaCl不生长者可确定为链球菌属细菌。 β-溶血链球菌鉴定 (1)Lancefield群特异性抗原鉴定：B群为无乳链球菌，F群为米勒链球菌。 (2)PYR试验：化脓性链球菌阳性 (3)杆菌肽敏感试验：化脓性链球菌阳性。 (4)VP试验：挑取平板上孵育过夜菌落置于2ml VP肉汤中，孵育6h后加入VP试剂，摇匀30秒，出现桃红色者为阳性。 （5）CAMP试验 链球菌属内的鉴定试验 非β溶血链球菌鉴定 抗链球菌溶素O抗体检测 常用于风湿热的辅助诊断。 活动性风湿热患者抗体效价一般超过400单位 。 第三节 肠球菌属 广泛分布在自然界。 常栖居在人、动物的