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第一章 兽医临床生化检验的 实验室基本技术 1 第一节 常用临床生化检验技术 光谱分析技术 电化学分析 电泳技术 常用技术 层析技术 离心技术 自动生化分析技术 2 一、光谱分析技术 掌握： 分光光度技术的基本原理 分光光度计的基本结 分光光度计的操作方法 分光光度技术的定性和定量方法 3  光谱分析技术原理： 利用各种化学物质都具有发射、吸收或散射 光谱谱系的特征，以此来确定物质性质、结构或 含量。 光谱分析技术的分类 火焰光度法 发射光谱 原子发射光谱法 荧光光谱法 光谱分析 紫外、可见光分光光度法 技术分类 吸收光谱 原子吸收分光度法 红外光谱法 散射光谱：比浊法 4 (一)分光光度技术的基本原理 1、吸光度与透光度 当光线通过均匀、透明的溶液时可出现三种情况： 一部分光被散射，一部份光被吸收，另有一部分光透 过溶液。设入射光强度为I0，透射光强度为I，I和I0 之比称为透光度，即： T = I/I0 T×100为T%称为百分透光度。透光度的负对数称 为吸光度即： A = -lgT = -lgI/I0 = lgI0/I 5 2、Lambert-Beer定律 Lambert-Beer定律是讨论溶液吸光度同溶液浓度和溶液层 厚度之间关系的基本定律，该定律是分光分析的理论基础。其 表达式为： A = KLC （Lambert-Beer定律适用于可见光、紫外光、红外光和均匀非散射的液体。） 式中A为吸光度；K为比例常数，称为吸光系数；L为溶液 层厚度，称为光径；C为溶液浓度 6 据Lambert-Beer定律，当液层厚度为 cm，浓度单位为mol/L时，吸光系数K称为 摩尔吸光系数(ε)。ε的意义是：当液层 厚度为1cm，物质浓度为1mol/L时在特定波 长下的吸光度值。ε是物质的特征性常数。 7 （二）偏离Lambert-Beer定律的因素 应用Lambert-Beer定律产生误差主要来源于光学 和化学两方面的因素。 1．光学因素： 要求入射光是单色光。入射光的谱带越宽，其误差越大。 2．化学因素： 浓度、pH、溶剂和温度等因素可影响化学平衡。