细胞工程的基本技术.pptVIP

③间歇灭菌法 间歇一定时间连续消毒几次达到灭菌目的的方法 每次灭菌条件为100℃、20～30 min，杀死其中的营养体 灭菌后置灭菌物品于室温或温箱中约24 h，使芽孢萌发成营养体，再次灭菌时被杀死 适用于某些不耐高温的物品和培养基灭菌 ⑵干热灭菌 采用灼烧或干热空气灭菌的方法 虽然干燥高热空气的穿透力不如湿热蒸汽强，但它使用方便，故广泛使用于实验室和生产实践 常用干热灭菌方法： 火焰灭菌法 干热灭菌法 ①火焰灭菌法 通过火焰高温灼烧进行灭菌的方法 接种环、接种针、剪刀、镊子等金属工具通过火焰灼烧可彻底灭菌 试管口、玻璃瓶口等通过几次火焰，温度可达200℃以上，可杀死一切微生物和芽孢 ②干热灭菌法 利用加热的高温空气进行灭菌的方法 烘箱是干热灭菌的常用仪器 适用于玻璃器皿和金属器械等物品的灭菌，不适用于液体材料和含水份的培养基等材料的灭菌 160℃～180 ℃ 维持40 min，或120 ℃灭菌2 h 玻璃器皿放入烘箱前必须完全干燥，以免引起破裂；灭菌温度要缓慢上升，灭菌后待温度下降到60 ℃下才能开箱门 二、辐射灭菌 辐射是通过波动或粒子在空间高速运行而传达能量的一种物理现象，利用辐射产生的能量进行杀菌的方法，称为辐射灭菌 辐射可分电离辐射和非电离辐射两种 α-射线、β-射线、γ-射线、X-射线、中子和质子等属电离辐射 紫外线、日光为非电离辐射 ⑴电离辐射灭菌 α-射线、β-射线、γ-射线、X-射线等波长极短，辐射能很大，可将被照射物质原子核周围的电子击出，使其变为阳离子，击出的电子可附着在其它原子上，使其变成阴离子，也可以再冲击其它原子，引起继发电离 在液体中，射线使水电离成H＋和OH－，它们是强烈的氧化剂和还原剂，可直接作用于微生物细胞本身，致使微生物死亡 在微生物周围环境中的液体内，经常有氧存在→离子与氧分子结合→过氧化物（强氧化性）→微生物细胞中的蛋白质、酶等氧化变性→细胞受到损伤而死亡 在一定的范围内射线的杀菌作用与剂量成正比 射线对微生物的杀菌作用，与微生物所处的环境条件和微生物的类型及生理状态有关，一般芽孢比营养体耐电离辐射，干燥状态比液体中耐辐射，无氧比有氧下耐辐射，培养基中有还原剂比无还原剂耐辐射 辐射灭菌不使物品升温，而且穿透力强，可直接对密封包装的物品进行灭菌 适用于处理量大且不适合高压或过滤等方法消毒的培养用品 培养工作中和临床上所用的多种一次性器械和物品，如培养瓶（皿）、培养板、注射器、移液器吸头、离心管等 电离辐射需要专门的设备和专业人员操作 ⑵紫外线（UV）杀菌 通过直接破坏微生物的核酸和蛋白质等使其灭活，以及间接通过UV照射产生的臭氧杀死微生物 紫外线波长范围在180-380 nm间，最具杀菌力的波长范围在250-260 nm 间，尤以254 nm附近最强 紫外线穿透力很弱，一层普通玻璃或水均能滤去大量的紫外线，因此紫外线只适用于空气和物体表面的消毒 三、过滤除菌 通过机械性阻留微生物而达到无菌要求；选用过滤器0.22μm孔径，可以完全除菌 适用范围：不能高温灭菌的溶液（如维生素、酶液、血清等） 设备：蔡氏过滤器，滤膜过滤器 优点：不破坏溶液中的生物活性物质，不产生有害物质 缺点：只适用少量滤液；需大量无菌空气以及净化工作台 四、化学杀菌 利用化学药剂进行杀菌或抑菌之方法 常用化学药剂种类 重金属盐类 氧化性消毒剂 还原性消毒剂 表面活性消毒剂 抗生素 ⑴重金属盐类 所有的重金属盐类对微生物都有毒害作用，如汞、银、铅、锌、铜等，微生物浸在0.1～0.5%硝酸银（AgNO3）、升汞（HgCl2）等溶液中，几分钟就会死亡 原理：重金属离子带正电，容易与带负电的菌体蛋白结合，使其凝固变性 低浓度重金属离子与酶或某些活性物质的活性基团（如巯基）结合，使酶失活，对微生物起到杀死或抑制的作用 低浓度重金属离子可与酶或某些活性物质的活性基团（如巯基）结合，使酶失活，对微生物起到杀死或抑制的作用 ⑵氧化性消毒剂 原理：通过强烈的氧化作用破坏微生物的原生质或酶蛋白的结构 常用的氧化剂有高锰酸钾、过氧化氢、臭氧、过氧乙酸、漂白粉等 高锰酸钾、过氧化氢常用的浓度为1%；过氧乙酸为0.2-0.5%；漂白粉为0.5-1.2% ⑶还原性消毒剂 甲醛是常用的还原性消毒剂，能与微生物细胞蛋白质的氨基结合，引起蛋白质变性 作为商品的福尔马林为37-40%的甲醛溶液，5%的福尔马林溶液常用于防腐和种子表面消毒，可杀死细菌芽孢和真菌孢子 常用于培养室、接种室的熏蒸灭菌（100 ml甲醛加5 g高锰酸钾为一个使用单位，每20 m2放置一个剂量单位） ⑷表面活性消毒剂 乙醇、石炭酸（苯酚）、来苏水（煤酚皂溶液）、新洁尔灭等为常用表面活性消毒剂 乙醇能降低表面张力，改变细胞膜的渗透性及原生质的