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XX大学 毕业论文 肺组织灌注前后双向电泳的比较 姓 名： 2014年6月25日 肺组织灌注前后双向电泳的比较 作者：李圣青，赵峰，戚好文，张晓君，赵馨，潘刚, 吴哲，王宇，阙海萍，刘少君 【关键词】双向电泳 摘要：目的 寻找更加有效的双向电泳方法以展示肺组织蛋白。方法 取 6只Wistar大鼠随机分为对照组和灌注组，用丙酮/三氯醋酸法提取肺组织蛋白 并进行双向电泳分离，将2D胶银染后用ImagcScanncr扫描仪扫描，采用 ImageMaster 2D Elite 3.10软件进行图象分析。结果 对照组2D胶的蛋白点计数 为1095±5,灌注组蛋白点计数为1 569±10。在分子质量30-70ku范围内，灌注 组的蛋白点计数显箸高于对照组(P0.01),在其他分子质量范围内二者蛋白点计数 无显著性差异。在pH值5?8、9?10范围内，灌注组的蛋白点计数显著高于对照 组(P0.01),在其他pH值范围内二者蛋白点计数无显著性差异。结论 生理盐水 灌注法可显著减少肺组织屮的血液蛋白成分，使得肺组织蛋白可以更好的在2D 胶上展示。 关键词：双向电泳；肺组织；灌注 ABSTRACT: Objective To find a better way to display lung tissue proteins by 2dimensional electrophoresis(2DE). Methods Lung tissue was obtained directly or after saline perfusion. Proteins were extracted by acetone/TCA methods and separated by 2DE to identify differently displayed proteins. The silverstained 2DE were scanned with digital ImageScanner and analyzed with ImageMaster 2D Elite 3.10 software. Comparison of protein spots obtained directly or after saline perfusion was carried out in statistical ways. Results The saline perfusion group displayed 1569±10 protein spots on 2DE gels and the control group 1095±5 protein spots. The saline perfusion group displayed more proteins between 30-70ku than the control group, and had no difference with it in the other molecular weight range? The saline perfusion group also displayed more proteins between pH 5-8 and 9-10 than the control group, and had no difference with it in the other pH range. Conclusion The saline perfusion methods can greatly reduce a few families of high abundance proteins(albumin, immunoglobulins) in sera, so the lung tissue proteins can be better displayed on 2DE gels. KEY WORDS: 2dimensional electrophoresis; lung tissue; perfusion 蛋白质组学是继基因组学之后飞速发展的一个学科。比较蛋白质组学在研 究疾病的发生、发展和转归，寻找疾病特异性的诊断指标和药靶方而发挥着越来 越重要的作用。双向电泳技术是一种先进的蛋白展示技术，是蛋白质组学的重要 研究方法之一。目前，在呼吸系统疾病的研究中，双向电泳技术多用于肺部肿瘤 细胞系、肿瘤组织、肺泡灌洗液的研究。但该技术用于展示栓塞肺组织的蛋白仍 未见报道，究其原因，主要是海绵样的肺实质中充斥着大量的血液成分。这些血 液成分(蛋口)，如血浆口蛋口、转铁蛋白、免疫球蛋口和血红蛋口等，在蛋白提 取过程屮混杂于帅组织蛋白屮，由于这些蛋白均为高丰度蛋白，不但会在2D胶 上掩盖肺组