《221和222动物细胞培养和核移植技术》-课件设计（公开）.pptVIP

动物细胞工程 思考讨论：在动物细胞培养过程中，为什么要用胰蛋白酶对取出的动物组织进行处理？ 有关概念 原代培养：从机体取出后立即培养的细胞为原代培养。 传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。 合成培养基：将细胞所需营养物质按其种类和所需数量严格配制而成的培养基。 植物组织培养和动物细胞培养的比较 旁栏思考 为什么对动物细胞进行培养时通常要添加血清？ 3.1997年，美国威斯康星州的一个奶牛场有一头名叫卢辛达（Lucinda）的奶牛，年产奶量为30.8 t，创造了世界奶牛产奶量最高新纪录。目前世界各国高产奶牛场奶牛，年平均产奶量一般为十几吨，而我国奶牛产奶量年平均水平仅为3～4 t。 提示：在研究方面，克隆动物基因组重新编程的机制尚不清楚，克隆技术效率低，克隆动物畸形率高、死亡率高、易出现早衰等问题。这些问题尚在研究中。在应用上，生产克隆动物费用昂贵，距大规模应用还有一定距离。 知识结构 动物细胞培养和核移植技术 动物细胞融合 植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较 二、单克隆抗体 B淋巴细胞与抗体的关系 单克隆抗体 如何大量生产单克隆抗体？ 利用淋巴细胞产生抗体的功能 利用肿瘤细胞无限增殖的特性 利用细胞融合的技术将两种细胞融合获得具有淋巴细胞和肿瘤细胞特性的杂交瘤细胞 利用动物细胞培养技术大量培养杂交瘤细胞 3.植物体细胞杂交技术与动物细胞融合技术有什么不同？ 植物体细胞杂交技术与动物细胞融合技术基本相同,不同的是植物体细胞融合前需去掉细胞壁,然后再融合;动物细胞融合是两个体细胞直接融合。 一、动物细胞融合（细胞杂交） 1、概念： 指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。 2、结果： 形成单核的杂交细胞 3、原理： 细胞膜的流动性 4、诱导方式 物理法：离心、振动、电激 化学法：聚乙二醇（PEG) 生物法：灭活的病毒 5、过程： 动物细胞A 动物细胞B 诱导，融合 2个完整的杂交细胞AB 有丝分裂 （膜融合、质融合） （核融合） 注意：动物细胞的融合也需要把多个两种细胞放在一起，让它们随机融合后，再从中筛选杂交细胞 6、意义：突破了有性杂交方法的局限， 打破生殖隔离,使远缘杂交（种间、属间、科间、动植物之间）成为可能。 7、应用：成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段 特别是利用杂交瘤技术制造单克隆抗体 制备单克隆抗体 获得杂种植株 用途 物理、化学方法（同左） 灭活的病毒 物理（离心、振荡、电刺激） 化学（聚乙二醇） 诱导方法 使细胞分散后诱导细胞融合 去除细胞壁后诱导原生质体融合 细胞融合的方法 细胞膜的流动性 细胞膜的流动性、 细胞融合原理 动物细胞融合 植物体细胞杂交 比较项目 什么是抗体？ 　　抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。 B淋巴细胞产生抗体。 　１．B淋巴细胞受抗原刺激后，可以产生特异性抗体。 　２．动物在免疫反应过程中，体内产生特异性抗体种类可达百万种以上，每种抗体对特定的抗原具有特异性免疫作用。 　３．但每一个Ｂ淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。 　 　４. 在体外，一个Ｂ淋巴细胞是不可能无限增殖的。　 　　由单个B淋巴细胞经过无性繁殖（克隆），形成基因型相同的细胞群，这一细胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体称为单克隆抗体。 　　特点： 　　　特异性强、灵敏度高 一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 骨髓瘤细胞（癌细胞）能无限增殖 杂种细胞 动物细胞培养技术 1.设计方案： 动物细胞融合 创始人：米尔斯坦 单克隆抗体 既能产生特异性抗体，又能大量繁殖 2.单克隆抗体制备过程 注射抗原 B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 细胞融合、筛选 杂交瘤细胞 细胞培养 筛选，继续培养 足够数量的、能产生特定抗体的细胞群 体外培养 注射到小鼠腹腔 单克隆抗体 动物细胞融合技术 B 、BB 、B瘤 、瘤瘤 、瘤 只有杂种细胞才能活 动物细胞培养 单克隆抗体制备过程 获得产生相应抗体的B淋巴细胞 思考： 1.本过程利用了哪些技术？ 免疫学、细胞融合技术、动物细胞培养技术 2.为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B细胞融合？ 这样融合成的杂交瘤细胞，继承了双亲细胞的遗传物质，不仅具有B细胞分泌抗体的能力，而且还有无限增殖的本领，因而可以获得大量单克隆抗体 * 动物细胞培养 动物细胞融合 制造单克隆抗体 核移植 动物细胞工程常用技术 一、动物细胞培养 1.发展历史: 20世纪初，人们不知道神经纤维是由神经细胞的细胞质向外突出形成的，还是由神经细胞周围的其他细胞融合而成的。生物学家们就这