生物技术第英四讲植物组织培养的理论基础.ppt

第一节?? ? 植物细胞的全能性 生物体具有“某种机制”来感知和正确估计环境的变化，以便在体内加以校正，保证体内平衡，来应付突变的环境。如有植物种子休眠期很长，可以避开旱、涝、冷、热等恶劣环境（如：500年前莲子发芽,沙漠绿洲）。有的植物对虫蛀有应激反应，虫蛀后，非但不减产，甚至还能增产。变色龙的变色、壁虎的尾巴等等。 细胞全能性所需要的条件： ⑴离体损伤刺激； ⑵营养物质及激素的刺激； ⑶培养温度、光照等的影响。 愈伤组织的生长 1 诱导期 外植体细胞进行分裂准备的时期。 外植体细胞外形没多大变化，但细胞内合成代谢活跃，RNA含量迅速增加，细胞核体积明显增大。 愈伤组织的生长 2 分裂期 外植体细胞开始迅速分裂，但外植体中间部分不分裂。 细胞分裂高峰期的标志：细胞体积最小，细胞核和核仁最大，细胞内无大液泡，RNA含量最高。 愈伤组织的生长 3 形成期 指外植体细胞经过诱导期和分裂期后形成了无序结构的愈伤组织的时期。 细胞分裂由原来局限在外缘的平周分裂转为组织内部的较深层局部分裂。 平周分裂（横向分裂）：使细胞层数增多，组织加厚。 垂周分裂（径向分裂）：使同一层细胞数量增多，使表面积增大。 优良愈伤组织一般应具备的条件： 1 旺盛的自我增殖能力，以便于用这些愈伤组织建立大规模的愈伤组织无性系。 2 容易散碎，以便于用这些愈伤组织建立优良的悬浮系，并且在需要的时候能从中分离出全能性的原生质体。 3 高度的胚性或再分化能力，以便于从这些愈伤组织得到再生植株。 4 经过长期继代培养而不丧失胚性，以便于可能对他们进行各种遗传操作。 为达到以上目的，诱导愈伤组织 采取的策略 1 选择合适的基因型和适当的外植体 2 选择合适的培养基 3 采用某些特殊的理化因素改变愈伤组织诱导培养基和培养条件 例子：玉米幼胚愈伤培养，5mg/L硝酸银，抑制组织内乙烯的作用。 根据对一些禾谷类植物体细胞愈伤研究，将愈伤分3个类型： 1 结构致密，生长较慢，容易分化成苗，称为保守分裂型 2 结构松脆，生长旺盛，色泽鲜艳，增殖较快，称为亢进分裂型 3 结构疏松，生长缓慢，色泽暗淡，称为衰败型。 器官分化途径： 1 先分化芽，等芽伸长后在其幼茎基部长根，形成完整小植株 2 先分化根，再在根上产生不定芽而形成完整植株 3 在愈伤组织的不同部位分别形成芽和根，然后二者的维管组织互相连接，成为小植株。 体细胞胚发生时期 单细胞 小细胞团 球形期 鱼雷形期 心形期 2 外植体先愈伤化，然后由愈伤组织内分化产生体胚。 细胞全能性的利用 人工种子： 1 体胚 2 人工胚乳 （促进生长的微生物、营养物质、杀虫剂等） 3 种皮 （褐藻酸钠+ 氯化钙） ⑷光照和温度的影响 各种植物对光照和温度的要求不同。 有的植物需要在黑暗条件下诱导愈伤组织；但也有的植物在光照条件下诱导愈伤组织，其植株再生率更高。 对温度的要求，往往耐高温植物或起源热带植物，所需培养温度较高（如甘薯）；而耐低温植物，培养温度较低。一般植物培养温度在25℃左右。 二、愈伤组织的生长 经脱分化 导致 细胞――→具备了分裂能力――→ 结果细胞不断增殖――→愈伤组织的生长 愈伤组织的生长并非一致进行，待细胞分裂到一定时期，便会停止分裂。但如果把处在旺盛生长且未分化的愈伤组织切成小块进行继代培养，可维持其活跃生长。利用此特点，进行继代培养，可大量增殖。 也有例外，有的情况下，组织细胞经脱分化后，不形成愈伤组织，而是从脱分化的细胞上直接再分化器官。 三、细胞分化和组织分化 （一）细胞分化及其影响因素 细胞分裂分化成什么样的细胞，是拟分生组织细胞，还是维管组织细胞，或是其它细胞? 影响细胞分化的因素： 1.??生长调节剂（激素）。培养基中添加生长素、细胞分裂素等的种类、浓度及配比。2.培养基种类（营养成分）3.??糖类物质。例如培养基中添加蔗糖浓度，过低、过高都不利，一般在2.5%—3%比较适宜。4. 其它理化因子。如光照时间、光照强度、培养温度、培养基pH值等。 （二）组织分化 在细胞分化的基础上，可以分