碱基顺版序的化学分析法.pptVIP

M13载体系统的双脱氧链终止法序列测定 单链模板DNA的制备 双脱氧测序反应 序列胶高压电泳及放射自显影 DNA序列的阅读 单链模板DNA 的制备 将待测目的DNA插入到M13载体上的MCS中，通过转染受体菌获得重组克隆的噬菌体。M13感染细胞后并不使细胞裂解，但感染的细胞生长缓慢，并不断释放成熟的噬菌体，一个细胞在噬菌体复制的每一代释放出200左右的噬菌体。在液体培养基培养感染细胞时，噬菌体不断从细胞中释放出来并在培养基内积累。 从单一噬菌斑形成的噬菌体颗粒或从细菌菌落中小规模制备单链M13噬菌体或噬菌粒DNA，常用的方法有PEG法及乙酸沉淀法。 PEG法制备M13实验程序 双脱氧测序反应 利用Klenow片段酶的测序反应 一 引物与模板的退火 Klenow片段酶介导的链延伸-链终止反应 RT反转录酶的介导的链延伸-链终止反应 二根据BRL公司提供程序略加改动 准备工作——配制核苷酸贮存液 引物与模板的退火 链延伸-链终止反应 三 以下根据Boehringer Mannheim公司提供的资料编写 准备工作——配制d/ddNTP混合液 引物-模板退火 链延伸-终止反应 3.5核酸碱基顺序分析中的化学方法 DNA化学顺序方法于1977年