华蟾素对人膀胱癌t24细胞体外作用及其机制的实验研究-中西医结合专业论文.docxVIP

浙江中医药大学 浙江中医药大学 09 届硕士毕业论文 万方数据 万方数据 中文摘要 华蟾素对人膀胱癌 T24 细胞体外作用 及其机制的实验研究 目的 研究华蟾素在体外对人膀胱癌 T24 细胞增殖的影响，细胞凋亡的诱导作用以及细 胞侵袭转移能力的影响，并探讨其可能作用机制。 方法 实验分三部分。第一部分用 MTT 法观察不同浓度（0.625~80μg/mL）的华蟾素 作用不同时间（24h、48h、72h）后对 T24 细胞增殖的影响。第二部分采用光学显微镜 及荧光染色形态学观察经华蟾素作用后 T24 细胞产生的凋亡形态学改变，应用流式细胞 仪检测细胞凋亡率及细胞周期的变化。第三部分应用划痕愈合实验检测华蟾素对 T24 细 胞迁移能力的影响。 结果 1、MTT 实验显示华蟾素能显著抑制 T24 细胞的增殖，并随药物浓度升高 （0.625~80μg/mL）和作用时间的延长（24~72h）而抑制作用增强，呈明显浓度和时间 依赖性。华蟾素（0.625~80μg/mL）作用 24h 后，T24 细胞增殖抑制范围为 4.83%~40.34%， 而在 48h、72h 后的抑制率分别为（5.65%~59.29%）和 7.29%~87.19%。2、光学显微镜 下显示不同浓度华蟾素（0，10，20，40 和 80μg/mL）作用于 T24 细胞 4 小时后，细胞 密度呈剂量时间依赖性降低，同时可观察到部分凋亡细胞所具有的典型形态学改变。流 式细胞仪检测不同浓度（0，10，20，40 和 80μg/mL）的华蟾素作用于 T24 细胞 24h 后凋亡细胞所占比率分别为 3.2%、9.91%、16.0%、21.1%和 26.3%,和羟基喜树碱对照组 （17.2%）相比，细胞凋亡率呈明显浓度依赖性增高，差异具有显著性。实验结果还显 示不同浓度华蟾素作用 T24 细胞 24h 后，S 期细胞逐渐增多，表明华蟾素可将 T24 细胞 周期阻断于 S 期，使之不能进入 G2/M 期，并且呈剂量依赖性。3、划痕实验表明华蟾 素（5~80μg/mL）作用 24h 后，T24 细胞的迁移能力逐渐降低，呈显著的浓度依赖性。 结论 1、华蟾素能显著抑制 T24 细胞增殖，其抑制作用呈时间和剂量依赖性。 2、华蟾素能诱导 T24 细胞凋亡，凋亡的诱导作用呈剂量时间依赖性。T24 细胞周期阻 断于 S 期，不能进入 G2/M 期，并且呈剂量依赖性。3、华蟾素能显著抑制 T24 细胞的 迁移能力。 主题词：膀胱癌 T24 细胞；细胞增殖；凋亡；迁移 I ABSTRACT The Experimental Study of the Effects and Mechanism of Cinobufagin on Human Bladder Carcinoma T24 Cells Objective To investigate the effects of cinobufagin on growth inhibition,apoptosis、 invasion and metastasis of human bladder carcinoma T24 cells,and approach corresponding molecular mechanism of T24 cells. Methods There have three part to study. The first, the cytotoxic effect of cinobufagin on human bladder cancer T24 cells was determined with varying concentration of cinobufagin (0.625~ 80μg/mL) treatment for 24, 48 and 72 hours by MTT assay. The second, We determined whether cinobufagin–mediated loss of T24 cells viability was the result of the induction of apoptosis. The extent of apoptosis was quantified by flow-cytometric analysis of cinobufagin–treated cells labeled with PI. The cell cycle arrest effect of cinobufagin on human bladder cancer T24 cells was determined with varying concentration of c