DNA重组技术基本工具.pptVIP

温故知新 1.什么是基因？ 2.基因与DNA、染色体的关系如何？ 3.基因存在于细胞的哪些结构中？ 4.基因重组有哪些类型？ 5.为什么人的基因可以与大肠杆菌的DNA拼接在一起？ 6.为什么人的基因可以在大肠杆菌细胞内表达？ 定向改造生物的设想 转基因抗虫棉 （2）种类与命名： 现在已经从约300种微生物中分离出了约4000种限制性内切酶(限制酶)。 （4）限制酶的作用结果：产生黏性末端或平末端 （2）限制酶在它识别序列的中轴线处分别切开DNA的两条链，产生的DNA片段末端是平齐的，称为平末端。 　 　 DNA聚合酶 将单个脱氧核苷酸连接成DNA链的主要酶是（ ） A. DNA连接酶 B. DNA酶 C. DNA解旋酶 D. DNA聚合酶 3.基因进入受体细胞的“运输车” ——运载体 (1)作用： (2)种类： 运载体必须具备的条件？ 假如目的基因导入受体细胞后不能复制，将会怎样？ 作为载体没有限制酶的切割位点将会怎样？ 怎样检测目的基因是否导入受体细胞？ 如果载体对宿主细胞有害将会怎样？ 质粒的特点 1.细菌染色体（或拟核DNA）外能自主复制的小型 环状DNA分子； 2.质粒的存在对宿主细胞无影响； 3.质粒的复制只能在宿主细胞内完成。 课后练习参考答案 2和7能连接形成…ACGT… ????????????? …TGCA…； 4和8能连接形成…GAATTC… ???????????? …CTTAAG…； 3和6能连接形成…GCGC… ???????????? …CGCG…； 1和5能连接形成…CTGCAG… ???????????? …GACGTC…。 2.基因工程中使用的限制酶绝大部分都是从细菌或霉菌中提取出来的，它们各自可以识别和切断DNA上特定的碱基序列。 细菌中限制酶之所以不切断自身DNA，是因为含有某种限制酶的细胞，其DNA分子中或者不具备这种限制酶的识别切割序列，或者通过甲基化酶将甲基转移到所识别序列的碱基上，使限制酶不能将其切开。 3.作为基因工程使用的载体必需满足以下条件： （1）有一个或多个限制酶的切割位点，以便目的基因插入。 （2）必须具备自我复制的能力，或整合到受体染色体DNA上随染色体DNA的复制而同步复制。 （3）必须带有标记基因，以便重组后进行重组子的筛选。 （4）载体必须是安全的，不会对受体细胞有害，或不能进入到除受体细胞外的其他生物细胞中去。 （5）载体DNA分子大小应适合，以便提取和在体外进行操作。 天然存在的质粒DNA分子并不完全具备上述条件，都要进行人工改造后才能用于基因工程操作。 3 .已知标记基因有抗四环素基因和抗青霉素基因，现欲探讨某细菌的质粒中有无标记基因或标记基因是什么？请设计实验、预期实验结果，并得出相应的实验结论。 ①实验原理：作为运载体的质粒，须有标记基因，这一标记基因是抗菌素抗性基因。有抗菌素抗性的细菌，其质粒才可用作运载体。 ③方法步骤： 第一步：取四个含细菌培养基的培养皿并标为1、2、3、4号，在酒精灯旁，用四支注射器，分别注入1mL蒸馏水、青霉素液、四环素液、青霉素和四环素的混合液，并使之分布在整个培养基表面。 第二步：将接种环在酒精灯上灼烧，冷却后在酒精灯火焰旁挑取菌种，对四个培养皿分别接种。 第三步：将接种后的四个培养皿放入37℃恒温箱培养24h，观察有无菌落生长。 ④预期结果及结论： 预期实验结果和实验结论： ①1号培养皿中有细菌菌落； ②2、3、4号培养皿中，仅2号出现细菌菌落，说明该质粒有青霉素抗性基因，而没有四环素抗性基因。 ③2、3、4号培养皿中，仅3号出现细菌菌落，说明该质粒有四环素抗性基因，而没有青霉素抗性基因。 ④2、3、4号培养皿中都有出现细菌菌落，说明该质粒有两种抗菌素的抗性基因。 ⑤2、3、4号培养皿中均无细菌菌落，说明该质粒没有这两种抗菌素的抗性基因。 内含子和外显子 原核生物的基因是编码蛋白质的一个完整的DNA片段；真核生物的大多数为蛋白质编码的基因都含有“间隔序列”，即不为蛋白质编码、转录产物不在成熟mRNA中出现的片段。 真核生物基因中不编码蛋白质的间隔序列称为内含子，而编码的片段则称为外显子。 类型 E·coli DNA连接酶 T4 DNA连接酶 来源 功能 大肠杆菌 T4噬菌体 恢复 磷酸 二酯键 只能连接黏性末端 能连接黏性末端和平末端 相同点 区别 将双链DNA片段“缝合”起来，恢复单链