小麦SSⅡ-A基因片段的克隆及其RNAi表达载体的构建.PDF

中国农学通报 2011,27(7):50-54 Chinese Agricultural Science Bulletin 小麦SSⅡ-A基因片段的克隆及其RNAi表达载体的构建 张付芸，陈伟霞，刘子渲，李保云，梁荣奇 （中国农业大学农学与生物技术学院植物遗传育种系，农业生物技术国家重点实验室，北京市作物遗传改良重点实验室， 农业部作物基因组与遗传改良重点实验室，北京100193） 摘 要：可溶性淀粉合成酶Ⅱ（SS Ⅱ）是小麦籽粒支链淀粉合成的主要角色，但是其三个部分同源基因 （SS Ⅱ-A 、SS Ⅱ-B 和SS Ⅱ-D ）对支链淀粉合成的贡献大小目前还未见报道，探究它们对支链淀粉合成的 作用，对小麦淀粉合成的遗传操纵和淀粉品质改良具有重要意义。此文通过RT-PCR 方法克隆了小麦 SS Ⅱ-A 基因cDNA 的部分序列（长度为539 bp ），经序列比对发现，它与AB201445.1（Triticum aestivum wSSII-A gene for starch synthase II-A, complete cds ）的同源性为100% 。以H 质粒为中间载体，构建了SS Ⅱ-A 基因片段的发夹结构，并将之连接到pBAC47P 上高分子量谷蛋白亚基（HMW-GS ）1Dx5 启动子的 下游，得到了高效特异的SS Ⅱ-A RNAi 表达载体。这些工作为下一步遗传转化获得转基因植株以深入 探究SS Ⅱ-A 基因对支链淀粉合成的贡献大小奠定了基础。 关键词：小麦；SS Ⅱ-A 基因；RNAi 表达载体 中图分类号：S512.1，S336 文献标志码：A 论文编号：2010-2735 CloningofSSⅡ-APartialSequenceanditsConstructionofRNAiExpressionVector Zhang Fuyun, Chen Weixia, Liu Zixuan, Li Baoyun, Liang Rongqi (StateKeyLaboratoryforAgrobiotechnology; BeijingKeyLaboratoryofCropGeneticImprovement; KeyLaboratoryofCropGenomicsandGeneticImprovement, MinistryofAgriculture; CollegeofAgronomyandBiotechnology, ChinaAgriculturalUniversity, Beijing 100193) Abstract: Soluble starch synthase Ⅱ(SS Ⅱ) is the main character of the enzymes that catalyse amylopectin synthesis, the exploration of its three homoeologous genes ’(SS Ⅱ-A, SS Ⅱ-B and SS Ⅱ-D) contribution to amylopectin synthesis is very important to the genetic manipulation of starch synthesis and the improvement of starch quality in wheat. Here we cloned partial sequence (539 bp) of wheat SS Ⅱ-A cDNA using RT-PCR technology, which completely aligns to AB201445.1 (Triticum aestivum wSSII-A gene for starch synthase II-A, complete cds). The hairpin structure of t