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微生物与免疫学实验（三） 血清学反应（二）： 录像：免疫标记技术 操作：ELISA 示教：免疫荧光（C301） 细菌学总论： 细菌基本形态、特殊结构 操作：革兰染色 （三）补体结合试验 方法： 待检系统：Ag（未知）+Ab（已知）+补体 指示系统：绵羊红细胞（Ag）＋溶血素（Ab） 结果：溶血——阴性 不溶血——阳性 免疫荧光技术（荧光抗体技术） 免疫荧光 酶联免疫吸附试验（ELISA）（Enzyme linked lmmunosorbent Assay） ELISA：间接法------用于测定抗体 ELISA：双抗体夹心法------用于测定抗原 ELISA：双抗体夹心法检测尿HCG 细 菌 总 论（一） 细菌的基本形态 杆菌（bacillus） 螺形菌（spiral bacterium） 细菌的特殊结构 荚膜、鞭毛、芽胞、菌毛 革兰染色操作步骤 【涂片】 取载玻片 接种环取混合菌液1-2环涂片（直径约1cm） 自然干燥 固定（通过火焰三次） 【染色】 结晶紫1min 水洗 碘液1min 水洗 酒精脱色30S 水洗 稀释复红1min 水洗 吸水纸印干 油镜观察 *注意无菌操作！ 有菌玻片放在水池旁玻片缸内! 作业：1、作图—细菌基本形态、特殊结构2、ELISA：原理、方法、结果、结论3、革兰染色：方法、结果（图示）作图请注意大小比例、标注 * * （四）中和反应（neutralization） 病毒中和试验 毒素中和试验 （五）免疫标记技术 将已知抗体标记上显示性物质，通过检测标记物，反映有无抗原抗体反应，从而间接测出微量的抗原或抗体。 常用的标记物有：酶、荧光素、放射性同位素、胶体金、生物素、电子致密物等。 【原理】是在免疫学、生物化学及显微镜术进展的基础上发展起来的一项技术，具有特异、敏感、快速的特点。将荧光色素（常用异硫氰基荧光黄，简称FITC）与特异性抗体（或抗原）以共价键基团牢固结合，但不影响该血清抗体的免疫特性。这种荧光标记的抗原抗体复合物，可通过荧光灯源中产生的紫外光或蓝紫光激发产生荧光，而从荧光显微镜加以观察。 【方法】主要有直接法和间接法。 【原理】把抗原抗体的免疫反应和酶（主要有辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶等）的高效催化作用有机地结合起来，并仍保持其免疫和酶的活性。结合在抗原抗体复合物上的酶在遇到相应的底物时，可以催化底物水解、氧化或还原，从而产生有色的物质。颜色反应的深浅与抗体或抗原的量成正比。 【方法】主要有间接法和双抗体夹心法。 器材：1个小杯/人，标本1、标本2 A、B、C液 方法：小杯内加标本两滴 甩干、水洗三次 加一滴C液（红色） 甩干、水洗三次 加A、B液各一滴 置于白纸上，观察结果 结果判断：蓝色为阳性 *瓶盖不能盖错，小杯用后扔进杂物盆！ 5min 5min 革兰染色法：1884年Gram创建，是细菌学中最为经典的染色法。 意义： 对细菌鉴别、选择抗菌药物、研究细菌致病性等有重要意义。原理： 与细菌细胞壁有关，尚未完全阐明。 细菌是一类具有细胞壁的单细胞微生物， 形体微小，一般以微米（μm）作为测量单位。 细菌按其外型可分为球菌、杆菌、螺型菌三大 类。不同种类的细菌大小不一，大多数球菌直 径约1μm，杆菌长2～5μm，宽0.3～1μm。 球菌（coccus） 弧菌：一个弯曲 螺菌：多个弯曲 荚膜（Capsule） 鞭毛（flagellum） 芽胞（spore） * * *