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基因芯片检测宫颈鳞状细胞癌hpvdna基因类型-病理学与病理生理学专业论文
延边犬学医学部顾J:研究生论文Human
延边犬学医学部顾J:研究生论文
Human papillomavirns genotyping by HPV DNA chip in cervical squamous cell carcinoma
Abstract
Objective:To exploe the human papitlomavirus(HPV)genotyping in cervical squamous cell carcinoma(SCC)
Methods:The唧V DNA chip harbors 27 HPV probes was used to investigate the
distribution of HPV genotypes in 47 cases of cervical SCC
Results:The prevalence of唧V in cervical SCC was 78.72%.HPV-1 6 was the most frequent type(85.29%)in single HPV infection,multiple HPV infection were
detected in 3 cases(2 double,1 triple)
Coclution:HPV Infection was closely related to SCC,HPV-1 6 was the most frequent type in SCC.HBV DNA Chip can simultaneously detect different HPV genotypes and multiple infection,and might be beneficial for prevention and management of SCC
Key words:HBV DNA Chip;genotyping;cervical squamous cell carcinoma
2
延边大学医学部硕士研究生论文前言
延边大学医学部硕士研究生论文
前言
子宫颈癌是世界范围内仅次于乳腺癌的妇科第二常见的恶性肿瘤。美国等西方国家自 广泛采用宫颈Pap smear以柬,宫颈癌的发病率和死亡率均下降 ,但年轻妇女宫颈癌的 发病率和死亡率却呈上升趋势。1;。在我国由于宫颈癌的普查、普治,使得宫颈癌的发病 率和死亡率在过去的几十年里明显下降。近十多年来由于人类乳头状瘤病 毒(human papillomavi FU S,HPV)的感染增多,富颈癌发病率在某些地区 明显上升,发病呈年轻化的趋势,已引起了国内的重视““3。延边地区自1995 年以后宫颈癌的发病明显增多,发病年龄呈年轻化的趋势”7。HPV某些高危 型的(如HPVi 6、18型)感染是宫颈癌发生的重要因素。近几年国外陆续 有利用基因:荟片检测宫颈癌前病变和富颈癌中HPV基因分型的报道,但国 内报道尚少。本文利用基因芯片检测了47例宫颈鳞状细胞癌中HPV的基因 类型,为防治本地区宫颈癌提供理论依据。
3
延边尢学医学部硕士研究生论文第一章
延边尢学医学部硕士研究生论文
第一章 材料和方法
1.1.资料来源:选择2002年4月至2003年9月在延边大学医院妇产科手 术切除的宫颈鳞状上皮癌47例(原位癌2例,浸润癌45例),年龄32—74 岁。HPV DNA ChiP试剂盒由Genomi cTtee(Daejun,Kotea)公司提供。 2.方法:全部标本经10%中性福尔马林固定,常规石蜡包埋,切片厚5—7肚m, 做H-E染色,用于病理学分类及癌组织的显微切割。
1.2 DNA提取:
在40倍显微镜下将H—E染色切片中的癌组织进行显微切割,放入 Eppendorf tube并加入500“l蛋白酶K消化缓冲液,在55。C一60 oC温箱中 孵育24小时,再加入RNase 1 0.5 Lll于37。C孵育1 5分钟,以清除污染的
RNA,加入蛋白PPT缓冲液7091并置于冰上冷却5分钟后,以1 5,000 Fpm 离心10分钟,清除分解的蛋白、RNA等物质。取上清液放入新的试管中, 加入i sopropano】2009l以15,000 rpm离心10分钟沉淀DNA,利用70%
乙醇清除残留的i sopropan01后,空气干燥沉淀物,最后用灭菌三蒸水20ul
溶解DNA在4 oC中保存备用。 1.3检测HPV DNA基因类型
提取的DNA进行PCR扩增,PCR反应液50ul包括1 0×PCR buffer(Mg” free,TaKaRa)5p1,25 mM MgCl 89l,Primer I,25 pmol e/肛l 0.59l,Pri mer
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