基因芯片检测宫颈鳞状细胞癌hpv+dna基因类型-病理学与病理生理学专业论文.docxVIP

延边犬学医学部顾J：研究生论文Human 延边犬学医学部顾J：研究生论文 Human papillomavirns genotyping by HPV DNA chip in cervical squamous cell carcinoma Abstract Objective：To exploe the human papitlomavirus(HPV)genotyping in cervical squamous cell carcinoma(SCC) Methods：The唧V DNA chip harbors 27 HPV probes was used to investigate the distribution of HPV genotypes in 47 cases of cervical SCC Results：The prevalence of唧V in cervical SCC was 78．72％．HPV-1 6 was the most frequent type(85．29％)in single HPV infection，multiple HPV infection were detected in 3 cases(2 double，1 triple) Coclution：HPV Infection was closely related to SCC，HPV-1 6 was the most frequent type in SCC．HBV DNA Chip can simultaneously detect different HPV genotypes and multiple infection，and might be beneficial for prevention and management of SCC Key words：HBV DNA Chip；genotyping；cervical squamous cell carcinoma 2 延边大学医学部硕士研究生论文前言 延边大学医学部硕士研究生论文 前言 子宫颈癌是世界范围内仅次于乳腺癌的妇科第二常见的恶性肿瘤。美国等西方国家自 广泛采用宫颈Pap smear以柬，宫颈癌的发病率和死亡率均下降 ，但年轻妇女宫颈癌的 发病率和死亡率却呈上升趋势。1；。在我国由于宫颈癌的普查、普治，使得宫颈癌的发病 率和死亡率在过去的几十年里明显下降。近十多年来由于人类乳头状瘤病 毒(human papillomavi FU S，HPV)的感染增多，富颈癌发病率在某些地区 明显上升，发病呈年轻化的趋势，已引起了国内的重视““3。延边地区自1995 年以后宫颈癌的发病明显增多，发病年龄呈年轻化的趋势”7。HPV某些高危 型的(如HPVi 6、18型)感染是宫颈癌发生的重要因素。近几年国外陆续 有利用基因：荟片检测宫颈癌前病变和富颈癌中HPV基因分型的报道，但国 内报道尚少。本文利用基因芯片检测了47例宫颈鳞状细胞癌中HPV的基因 类型，为防治本地区宫颈癌提供理论依据。 3 延边尢学医学部硕士研究生论文第一章 延边尢学医学部硕士研究生论文 第一章 材料和方法 1．1．资料来源：选择2002年4月至2003年9月在延边大学医院妇产科手 术切除的宫颈鳞状上皮癌47例(原位癌2例，浸润癌45例)，年龄32—74 岁。HPV DNA ChiP试剂盒由Genomi cTtee(Daejun，Kotea)公司提供。 2．方法：全部标本经10％中性福尔马林固定，常规石蜡包埋，切片厚5—7肚m， 做H-E染色，用于病理学分类及癌组织的显微切割。 1．2 DNA提取： 在40倍显微镜下将H—E染色切片中的癌组织进行显微切割，放入 Eppendorf tube并加入500“l蛋白酶K消化缓冲液，在55。C一60 oC温箱中 孵育24小时，再加入RNase 1 0．5 Lll于37。C孵育1 5分钟，以清除污染的 RNA，加入蛋白PPT缓冲液7091并置于冰上冷却5分钟后，以1 5，000 Fpm 离心10分钟，清除分解的蛋白、RNA等物质。取上清液放入新的试管中， 加入i sopropano】2009l以15，000 rpm离心10分钟沉淀DNA，利用70％ 乙醇清除残留的i sopropan01后，空气干燥沉淀物，最后用灭菌三蒸水20ul 溶解DNA在4 oC中保存备用。 1．3检测HPV DNA基因类型 提取的DNA进行PCR扩增，PCR反应液50ul包括1 0×PCR buffer(Mg” free，TaKaRa)5p1，25 mM MgCl 89l，Primer I，25 pmol e／肛l 0．59l，Pri mer