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脉得生物技术有限公司 Longmed, Inc. 体内可见光成像技术用于干细胞研究 1 2 1 王俊 , 张怡 , 赵春林 1 龙脉得生物技术有限公司, 2 中国协和医学院, 北京清华大学, 学研大厦A304. 邮编:100084 导言 干细胞在肿瘤治疗、组织工程和细胞治疗等方面拥有巨大的潜力。如果在活体动物体 内，在各种组织和器官都保持完整的情况下能够观察干细胞的行为和生物学特性，则会大 力促进基于干细胞的各种疾病治疗方法的研究工作。目前已对多种干细胞进行了大量的研 究，动物模型研究方法也很多，但典型的方法还是在移植后的几星期或几个月，通过解 实验动物以了解干细胞的功能。但采用这种研究方式，就无法得到移植后一些关键性的实 验数据，例如，移植后的前几个小时到几天时间造血干细胞在脾和骨髓的定位和增值情 况；移植后造血干细胞在动物体内的迁移情况等。体内可见光成像技术，主要是生物发光 成像（in vivo bioluminescence Imaging ，BLI)技术作为一种新型成像技术，在最近几年已 被广泛应用于在多种动物模型中示踪肿瘤细胞、造血干细胞，淋巴细胞，病原菌和病毒。 本节简要介绍体内可见光成像技术成像原理，成像系统使用方法和在干细胞研究方面的应 用。 一，体内可见光成像技术成像原理 体内可见光成像技术是采用荧光素酶（luciferase)基因（Luc ）标记细胞和基因，利用 一套非常灵敏的光学检测仪器，让研究人员能够直接监控活体生物体内的细胞活动和基因 行为。传统的动物实验方法需要在不同的时间点宰杀实验动物以获得数据, 得到多个时间 点的实验结果。相比之下，体内可见光成像通过对同一组实验对象在不同时间点进行记 录，跟踪同一观察目标 （标记细胞及基因）的移动及变化，所得的数据也更加真实可信。 另外, 这一技术由于 涉及放射性物质，具有操作简单，所得结果直观，灵敏度高等特点, 在刚刚发展起来的几年时间内，已广泛应用于生命科学、医学研究及药物开发等方面。 1. 细胞标记 1995 年，Contag 首次在小动物体内检测到带有lux 操纵子的病原菌发出的可见光。他 是通过CCD 相机捕捉到这个被感染动物的生物发光现象的。在1997 年，他又首次观察到 表达荧光素酶的转基因小鼠在注入荧光素酶底物后的生物发光现象[1]。自此，细菌及萤 火虫荧光素酶被广泛应用于小动物体内可见光成像技术。 哺乳动物生物发光，是将Luc 基因整合到细胞染色体DNA 上以表达荧光素酶，当外 源 （腹腔或静脉注射）给予其底物荧光素(luciferin) ，即可在几分钟内产生发光现象。这 种酶在ATP，氧存在的条件下，催化荧光素的氧化反应才可以发光，因此只有在活细胞 内才会产生发光现象，并 发光光强度与标记细胞的数目线性相关。对于细菌，lux 操纵 http :// PDF 文件使用 pdfFactory 试用版本创建 脉得生物技术有限公司 Longmed, Inc. 子由编码荧光素酶的基因和编码荧光素酶底物合成酶的基因组成，带有