第6章 基因操作中大分子分离和分析.pptVIP

* 西南大学生物技术专业 基因工程 * * 西南大学生物技术专业 基因工程 * * 西南大学生物技术专业 基因工程 * Southern Blotting的过程 1.碱变性的琼脂糖凝胶电泳分离的DNA 2.通过电泳液的移动转移胶中的DNA 3.固定胶中的DNA 4.预杂交和杂交(放射性和荧光检测) 5.结果检测 * 西南大学生物技术专业 基因工程 * Southern印迹杂交方法操作简单，结果十分灵敏，在理想的条件下，应用放射性同位素标记的特异性探针和放射自显影技术，即使每带电泳条带仅含有2ng的DNA也能被清晰地检测出来。 * 西南大学生物技术专业 基因工程 * 1.硝酸纤维素滤膜 在印迹技术中，硝酸纤维素滤膜是目前应用最广的一种固相支持物，但它存在一些不足之处: （1）硝酸纤维素滤膜是依赖疏水性相互作用结合DNA的，这种结合并不十分牢固，随着杂交及洗膜进程，DNA会慢慢脱离硝酸纤维素滤膜，从而使杂交效率下降。 （二）Southern杂交的杂交滤膜 * 西南大学生物技术专业 基因工程 * （2）硝酸纤维素滤膜质地较脆弱，容易碎裂，因此操作须小心谨慎 (特别是经烘烤后)。 （3）硝酸纤维素滤膜与核酸的结合有赖于高盐浓度，在低盐浓度时结合DNA效果不佳，不适宜于电转印迹法。 （4）硝酸纤维素滤膜对于小分子质量的DNA片段 (特别是小于200bp的DNA片段)