严重烧伤大鼠肺与膈肌凋亡及其机制的研究-外科学；烧伤阳专业毕业论文.docxVIP

解放军医学院博士学位论文 解放军医学院博士学位论文 万方数据 万方数据 英文缩略词表 英文缩写 英文全称 中文名称 Akt protein kinase B 蛋白激酶 B ALI acute lung injury 急性肺损伤 Apafl apoptotic prot臼se ?tivating facter-I 凋亡酶激活因子 AP alkaline phosphatase 碱性磷酸酶 ARDS acute respiratory distresss 沪ldrome 急性呼吸窘迫综合症 BCA bicinchoninic acid 二辛可宁酸 Caspase cysteinyl aspartate spocific proteinase 半肮氨酸天冬氨酸蛋白酶 cyt c cytochrome c 细胞色素 C Dapkl D四th-ass∞iated protein kinase 1 死亡相关蛋白激酶 1 EDTA Edet?c acid 乙二胶四乙酸 ELISA enzyme linked immunosorbent assay 酶联免疫吸附测定 FADD F邸-aas∞iated death domaín F出相关死亡结构域 GAPDH glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase 甘油醒-3-磷酸脱氢酶 E现P Horseradish Peroxidase 辣根过氧化物酶 sFas Soluble Fas 可溶性 F臼 sFasL Soluble F出 ligand 可溶性 Fas 配体 TUNEL TdT-mediated dUfPNick-End Labelíng 末端脱氧核昔酸转移酶介导的 dUfP 缺口末端标记测定法 2 万方数据 万方数据 解放军医学院博士学位论文作 解放军医学院博士学位论文 作 者：张旭龙 学科专业：外科学(烧伤) 导 师：柴家科 严重烧伤大鼠肺与膈肌凋亡及其机制的研究 中文摘要 目的严重烧伤患者往往伴随呼吸功能障碍，治疗效果差，因此被认为是烧 伤早期的主要死因之一。既往研究发现严重烧伤引起的肺损伤和呼吸肌萎缩是造 成呼吸功能障碍的两个主要原因。其中，凋亡在烧伤引起的肺损伤中扮演重要角 色：而骨骼肌核凋亡也被认为是严重烧伤后四肢骨骼肌萎缩的重要机制之一。因 此，本研究拟在此基础上探讨：1、严重烧伤大鼠肺组织凋亡发生的规律、对肺 组织的影响，以及H酗po信号通路可能的参与调节机制：2、严重烧伤大鼠膈肌 核凋亡发生的规律和死亡受体通路在其中扮演的角色。 方法l、Wistar大鼠32只(雄性，清洁级)，用随机数表法分为假伤组(SB 组)、烧伤组(B组)、烧伤12周康复组(12WR组)及烧伤12周康复+二次 烧伤组(12WB组)各8只。肺组织标本采集时间为：SB组和B组于致伤后第 4天：12WR组和12WB组则为接受为期12周的康复期后，再次分别接受第二 次假伤和烧伤，并于伤后第4天搜集标本，方法同前。使用Westcm印迹法检测 肺组织Bc}2、BcI-xl、Bax、剪切体CaSpase-3、YAP、P-YAP、MST、P—MST、 LA髑l、LAB2表达水平，使用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端 标记测定法(TUNEL)检测肺组织细胞凋亡水平，免疫组化检测肺组织P．YAP 表达水平，Masson三色染色和天狼星红苦味酸染色法用于检测肺组织胶原表达 水平：2、80只Wistar大鼠(雄性，清洁级)随机分2组：假伤组(斛O)和烧 3 解放军医学院博士学位论文 解放军医学院博士学位论文 伤组(萨40)，并分别在伤后第0、l、4、7、10天每组每次8只大鼠，取腹主 动脉血和完整膈肌。使用投射电镜(TEM)观察膈肌凋亡超微结构：使用免疫 组化观察膈肌Caspase一3表达；使用酶联免疫吸附试验(EUSA)检测血清sFas、 sFasL及sT黜UL水平：使用Western bbt检测膈肌Akt、P．AI(t、Bax、BcI-2、 caSpase-8、caspase-3蛋白表达水平。 结果l、Masson三色染色和天狼星红苦味酸染色病理均显示12WR组和12WB 组肺组织纤维化明显。大鼠肺组织细胞1rL腻EL凋亡率：B组、12R组及12WB 组均显著高于SB组(均P0．05)。B组、12R组及12WB组的剪切体CaSpase．3、 P-YAPⅣAP、Ba√Bcl-2、P．MST、MST和LA髑1均显著高于SB组(均尸0．05)。 P—YAP免疫组化提示，B组、12R组及12WB组的P．YAP表达增高。2、严重烧 伤后大鼠体重明显降低，膈肌重量和CSA也显著下降：透射电镜(TEM)观察 到烧伤后膈肌细胞胞质浓缩，胞膜边缘起泡，