艳果金丝桃再生官和遗传转化体系的分析.docx

艳果金丝桃再生和遗传转化体系的研究摘要 艳果金丝桃再生和遗传转化体系的研究 摘要 艳果金丝桃(Hypericum androsaemum L．)属藤黄科金丝桃属，是一种兼具观赏 和药用价值的花灌木。其花朵鲜黄色，果实红色，观赏价值极高，在园林绿化以及 插花中广泛应用。但艳果金丝桃易受到线虫和病原菌的侵害，使艳果金丝桃在自然 界的生长受到影响，种质下降。本研究在艳果金丝桃组培快繁和再生的基础上，通 过愈伤诱导再生和直接不定芽再生进一步完善其再生体系，并在此基础上，主要进 行了艳果金丝桃农杆菌介导遗传转化的研究，目标是建立艳果金丝桃遗传转化体系， 为通过基因工程实现抗性新品种的培育奠定基础。主要的研究结果如下： 1．探讨了艳果金丝桃愈伤组织诱导及再生体系 以艳果金trot‘Hyp4’基因型的叶片为外植体，MS为基本培养基，探讨了生长素 (2^D，NAA，U认，IBA)、细胞分裂素(6-BA，TDZ，KT)对叶片愈伤组织诱 导的影响。结果表明：2，4．D对愈伤组织的诱导作用显著，浓度在0．5mg／L．-1．0mg／L 时，愈伤诱导率达到100％，IBA和NAA处理下叶片外植体没有愈伤形成；细胞分 裂素6-BA，1DZ，KT单独处理对愈伤组织诱导没有显著作用；在生长素和细胞分 裂素结合，通过愈伤诱导率和愈伤质量进行分析，2，4．D与KT结合愈伤组织的诱导 效果较好，其中MS+2，4-D(0．5rag／L)+KT(0．5mg／L)作用下愈伤诱导率高达到90％， 愈伤量大。但总体比较愈伤分化能力较低。 2．完善了艳果金丝桃直接不定芽再生体系 在前期研究的基础上，以‘Hyp3’基因型的叶片为外植体，MS为基本培养基，比 较了滤纸和AgN03在再生过程中的作用，并进一步研究了不同浓度的TDZ(0．05 mg／L，0．1 mg／L，0．3rag／L)和NAA(0．0 mg／L，0．01mg／L，0．02mg／1．．，0．03rag／L) 结合对叶片不定芽分化的影响。结果表明：1．0mg／L AgN03在艳果金丝桃叶片不定 芽再生中效果最好，再生率达到72．5％，在添加滤纸处理下再生率仅为12．5％。在 激素研究中，TDZ对艳果金丝桃的叶片再生效果显著，而随着NAA浓度的升高， 再生率呈下降趋势。 在配方MS+TDZ(o．1mg／L)+NAA(0．0mg／L)+AgN03(1．0mg／L) 下，艳果金丝桃的再生率最高达到83．3％，平均再生芽数为3．8个，再生效果优于之 前配方。 华中农业大学201 华中农业大学201 l届硕士研究生学位论文 3．初步建立了艳果金丝桃农杆菌介导的遗传转化体系 以艳果金丝桃‘Hyp3’基因型为试验材料，对农杆菌介导的遗传转化进了探讨。 初步确立了艳果金丝桃不定芽再生的Km选择压为20．0mg／L，抑菌剂Cef的浓度为 100．0mg／L。通过GUS瞬时表达和转化后外植体生长状态分析，研究了预培养时间、 侵染时间、共培养、pH缓冲剂、抗氧化剂等对转化的影响，初步得出了‘Hyp3’农杆 菌介导遗传转化的基本条件：菌株EHAl05，预培养时间0d．，侵染时间5min．，共 培养时间3d，共培培养基为MS+TDZ(o．1ing／L)+NAA(0．01mg／L)+AS(40．0mg／L) +MES(2．09／L)，选择培养基为MS+TDZ(0．Img／Lp-NAA(0．0lmg／L)+AgN03(1．omg／ L)+cef(100．0mg／L)+Km(20．0mvdL)。 关键词：艳果金丝桃不定芽再生 根癌农杆菌遗传转化 2 艳果金丝桃再生和遗传转化体系的研究Abstract 艳果金丝桃再生和遗传转化体系的研究 Abstract Hypericum androsaemum L is a kind of shrub flower with ornamental and medicinal Values．It has b^gn yellow flowers and red fruits and is谢dcly used in landscaping and flower arrangement．However,because of plant diseases，pest harmful activities，the qulities of Hypericum androsaemum L．in nature is declining．So the objective of our present research WS tO optimize the adventitious shoot regeneration system of Hypericum al砌osaomlm L and establish the．49roba