发酵工工程实验方案.docVIP

生物发酵工程实验 实验一................................ 利用酵母富集培养基分离酵母菌 实验二 ... ......................... 分离纯化酵母菌 实验三... ......................... 酵母菌的保藏 实验四............................... 大肠杆菌生长曲线测定及pH对生长曲线的影响 实验五 .............................. 发酵罐的构造及操作 实验六 .............................. 发酵罐实灌灭菌操作 实验七 .............................. 利用7L发酵罐对地衣芽孢杆菌进行补 料分批发酵培养 实验八.............................. 淀粉酶生成曲线的测定 实验一、利用酵母富集培养基分离酵母菌 一 实验目的 通过本实验加深理解酵母富集培养基的原理和应用； 掌握涂布分离技术； 熟悉从自然样品土壤中分离酵母菌的 具体操作方法 二 实验原理 酵母菌主要分布于含糖高和酸度较高的自然环境中，在果园表土和浆果、蔬菜、花蜜和蜜饯等的表面很容易找到它们。在土壤中，由于各种微生物混杂在一起且酵母菌的数量相对比较少，故可以利用 酵母菌富集培养基进行富集培养，该培养基含有较高 的葡萄糖（5%）和较酸（pH为4.5）的环境，以及能抑制多种杂菌（许多细菌、放线菌和快速生长霉菌）的孟加拉红（玫瑰红），故十分有利于酵母菌的增值。 三 实验材料 土壤（标注采集地点） 培养基：酵母富集培养基（5%葡萄糖、0.1%尿素、0.1%硫化铵、0.25%磷酸二氢钾、0.05%磷酸氢二钠、0.1%七水合硫酸镁、0.01%七水合硫酸铁、0.05%酵母膏、0.003%孟加拉红、1.9%琼脂 pH4.5） 移液枪、培养皿、天平、涂布棒、棉绳、250ml三角瓶、75%酒精棉花、摇床等 四 实验步骤 1、采集土样：采集葡萄园或其他果园、菜地等的土壤若干（要求：先铲去2~3cm的表土，再采集土样）适当研碎。 2、称取1g土样装入准备好的30/250ml蒸馏水中震荡均匀。 3、准备平板：将酵母菌富集培养基加热融化，待冷却至50℃左右后，倒2个平板，冷却待用。 4、用移液枪吸取200ul样品，用涂布法分离菌种。 5、恒温培养：将培养皿倒置后防于37℃恒温培养箱中培养2d。 五 结果记录 将土壤来源，平板上得到的菌落特征和菌落数做表记录 六 思考题 酵母菌富集培养基中为什么要加孟加拉红 实验二 分离纯化酵母菌 一 实验目的 1、通过本实验学习掌握对菌种纯化及保种的操作； 二 实验原理 从混杂微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物分离与纯化。在分子生物学的研究及应用中，不仅需要通过分离纯化技术从混杂的天然微生物群中分离出特定的微生物，而且还必须随时注意保持微生物纯培养物的“纯洁”，防止其他微生物的混入。 三 实验材料 培养基：PDA培养基 材料：接种环、试管斜面、酒精灯、超净工作台、恒温培养箱等 四 实验步骤 观察前一次实验平板，找出符合条件的菌落。 2、在超净工作台中用接种环挑取单菌落一环在平板上画Z字型线条 3、将平板贴好标签后置于37℃恒温培养箱中培养2d。 五 结果记录 记录纯化斜面后的菌落形态 六 思考题 选取菌落时要考虑到那些因素及其原因。 实验三 酵母菌的保藏 实验目的 1、掌握细菌的一般保藏原理和方法 2、掌握甘油保种技术； 3、了解菌种衰退的原理 实验原理 菌种保藏是将微生物的菌种经长时间的保存，不污染其它杂菌，及可保持其形态特征和生理性状，减少变异，防止衰老，以便于将来使用。 菌种在传代过程中，原有的生产性状会逐渐下降，这就是菌种的衰退。衰退由菌株的自发突变引起，一旦发现衰退，就必须立即进行复壮。所谓复壮，就是通过纯种分离和性能测定等方法从衰退的群体中找到为衰退的个体，已达到回复该菌株原有形状的一种措施。要防止衰退，关键是做好菌种的保藏工作，即创造一定的物理和化学条件，如低温、干燥、缺氧气或缺养料等，来降低微生物细胞内酶的活性，使微生物代谢作用缓慢，甚至处于休眠状态。所以保藏菌种一般是选用它的休眠休，如孢子；芽孢等等，并且要创造一个低温；干燥；缺氧；避光和缺少营养的环境条件，以利于休眠体能长期地处于休眠状态。对于不产孢子的微生物，应使其新陈代谢处于最低状态，又不会死亡，从而达到长期保存的目的 三 实验材料 培养基：PDA培养基 材料：30%甘油、接种环、试管斜