生物化学15 章DNA损伤与修复.pptVIP

核苷酸切除修复（nucleotide excision repair） ① 首先，由一个酶系统识别DNA损伤部位； ② 其次，在损伤两侧切开DNA链，去除两个切口之间的一段受损的寡核苷酸； ③ 再次，在DNA聚合酶作用下，以另一条链为模板，合成一段新的DNA，填补缺损区； ④ 最后由连接酶连接，完成损伤修复。 受到ATP水解的驱动，2个UvrA与1个UvrB形成三聚体复合物 （UvrA2UvrB1）； 该复合物与DNA随机结合后，沿着DNA链移动，以探测损伤的位置。 识别损伤的过程比较缓慢，为限速步骤。 当遇到嘧啶二聚体时，通过水解ATP，造成损伤部位的DNA双螺旋发生局部解链和进一步弯曲，致使UvrB与损伤部位形成更紧密的接触； UvrA在ATP水解后离开复合物，留下UvrB横跨损伤部位； 大肠杆菌的核苷酸切除修复 UvrC被UvrB招募到损伤部位后激活UvrB的核酸内切酶活性，UvrB在距离嘧啶二聚体的下游4nt的位置切开DNA链； 与此同时，UvrC的核酸内切酶活性被UvrB激活，在距离嘧啶二聚体的上游7nt的位置切开DNA链； 于是，产生一个长达13nt的含有嘧啶二聚体的寡聚核苷酸片段。 大肠杆菌的核苷酸切除修复 在解链酶UvrD的作用下，ATP被水解，包含嘧啶二聚体的DNA片段发生解链而离开双螺旋，UvrC也随之而去； 最后，DNA聚合酶I或II填补空缺； DNA连接酶则缝合切口。 大肠杆菌的核苷酸切除修复 碱基错配修复（ mismatch repair） 错配是指非Watson-Crick碱基配对。 碱基错配修复也可被看作是碱基切除修复的一种特殊形式，主要负责纠正： ① 复制与重组中出现的碱基配对错误； ② 因碱基损伤所致的碱基配对错误； ③ 碱基插入； ④ 碱基缺失。 E.coli错配修复系统修复复制差错 Dam甲基化酶（methylase）使E.coli处于暂时的半甲基化状态，标记母链和新合成的DNA链，帮助新合成的DNA链被错配修复系统识别并修复。 模板链的GATC序列甲基化 MutH仅切割新合成的DNA链 MutH的切口位于错配核苷酸的5?侧，使用外切酶Ⅶ或RecJ，按5??3?方向降解DNA； 切口位于错配的3’侧，则使用外切酶Ⅰ，按3?? 5?方向降解DNA。 DNA聚合酶Ⅲ填补所产生单链DNA缺口。 三、DNA严重损伤时需要重组修复 同源重组修复 非同源末端连接的重组修复 双链断裂修复 同源重组修复——利用细胞内一些促进同源重组的蛋白质来从姊妹染色体或同源染色体那里获得合适的修复断裂的信息，这一种方式的精确性较高； 非同源末端连接（NHEJ）修复——在无序列同源的情况下，让断裂的末端重新连接起来，这种方式容易发生错误，是人类修复双链断裂的主要方式。 DNA双链断裂的重组修复 同源重组修复 哺乳动物细胞DNA双链断裂的非同源末端连接 非同源重组修复 损伤跨越 重组跨越使用同源重组的方法将DNA模板进行交换以避免损伤对复制的抑制，从而使复制能够继续下去，而随后的复制仍然使用细胞内高保真的聚合酶，因此忠实性并无下降，故此途径被视为一种无错的系统。 跨越合成又称为（TLS）跨损伤合成，由专门的DNA聚合酶与停留在损伤位点上的原来催化复制的DNA聚合酶交换，在子链上（模板链上损伤碱基的对面）插入正确或错误的核苷酸，结果导致对损伤位点无错或易错的跨越。 大肠杆菌的重组跨越 DNA损伤和修复的意义 The significance of DNA damage and repair 第三节 一、DNA损伤具有双重效应 一是给DNA带来永久性的改变即突变，可能改变基因的编码序列或者基因的调控序列； 二是DNA的这些改变使得DNA不能用作复制和转录的模板，使细胞的功能出现障碍，重则死亡。 DNA损伤通常有两个生物学后果 二、DNA损伤修复障碍与肿瘤等多种疾病相关 DNA损伤与肿瘤、衰老以及免疫性疾病等多种疾病的发生有着密切的关联 目录 有害物质富集 例: DDT在水环境中存在量仅为3×10-6ppm(mg/L)的时候，当它进入浮游动物体内就被富集为0.04ppm； 浮游动物被小鱼吃了，小鱼体内DDT富集量就变为0.5ppm； 当小鱼被大鱼吃了，大鱼体内DDT富集量就升高为2ppm； 当大鱼被鹰吃了，鹰体内DDT富集量就变为25ppm， DDT浓度整整富集了1000万倍。 如果人吃了鱼或鹰，那么人体内DDT富集量更是高得可怕。会引起突变 “低剂量、长期暴露的蓄积作用” DDT ，又作“滴滴涕”，学名双对氯苯基三氯乙烷，曾经是最著名的合成农药和杀虫剂。后来人们发现DDT不易降解。 DNA损伤与修复 DNA Damage and Repair 第十五章 各种体内外因素所导致的DNA组