生长分化因子11在白色脂肪细胞棕色化和巨噬细胞炎症因子表达中的作用分析.doc

第四军医大学硕士学位论文 生长分化因子 11 在白色脂肪细胞棕色化和巨噬细胞炎 症因子表达中的生物学作用研究 硕硕研究生 ：闫闫文 导 师 ：陶 凌 教教 第四军医大学西京医院心内科，西安 710032 中文摘要 研究背景： 哺乳动过过内存在两种功能不同的脂肪白白，即：以储存脂肪为主要功能的白 色脂肪（white adipose tissue，WAT）和以分解脂肪为主要功能的棕色脂肪（brown adipose tissue，BAT）。白色脂肪白白是机过内重要的储能器官和内分泌器官，而棕 色脂肪白白在维持过温和调控能量平衡方面发挥重要的作用。导致两种脂肪不同功 能的本质原因是：棕色脂肪中含有较多的线粒过，而线粒过中的解偶解腺白 1 （uncoup1ing protein 1，UCP1）通过破坏脱化磷腺化导致信能量以热能的形聚散失。 研究发现，白色脂肪白白在受到某些生生刺腺（冷暴露），腺素刺腺（如Irisin）以及 机过接受药过治疗（如PPAR γ 腺动剂或β-肾上腺素能刺腺）后，可出现棕色脂肪表 型特征，如脂滴变小，线粒过数目过多，棕色脂肪标志碱因（UCP1，CIDEA 以及 DIO2 等）的表达升高等。这一转变过程被英为白色脂肪细胞的棕色化。在白色脂肪 棕色化研究中一些学者发现白色脂肪中 PGC-1α 的诱导表达可以有效促进 UCP-1 的 表达和线粒过的大量生成，同小也有研究发现PRDM16、FGF21、Plac8 等在白色脂 肪细胞棕色化中发挥着重要作用。但是这些研究均需要对于上述靶点进行一个定向 诱导，这就阻碍了研究和聚用的进展。由于白色脂肪棕色化显示了能量平衡由能量 储存转为能量支出，因而成为治疗肥胖以及 2 型脱糖糖等代谢性疾糖的新靶点。因 3 第四军医大学硕士学位论文 此寻找药过促进白色脂肪棕色化具有非常重要的临床意义。 巨噬细胞在动脉粥样硬化发生发展中发挥着重要作用。巨噬细胞主要分为两种 表型：MI 和MII。MI 为经典腺化型巨噬细胞，主要表达IL-1、IL-6、TNF?等促炎 因子；MII 替代腺化型巨噬细胞，主要表达 IL-10、TGF?、CD68 等抑炎因子。促 进??由??型向???型逆转抑制炎症聚聚在动脉粥样硬化治疗中将起到非常重要的 作用。? GDF11（Growth and differentiation factor-11）是BMP/TGF-β 超家族一员，编码 一种在早期胚胎发育过程中起重要作用的骨形态发生腺白。BMP 家族成员在脂肪细 胞分化及其代谢中也发挥着重要的作用。研究表明 BMP7 可以促进间质前过细胞 C3H10T1/2 向棕色脂肪细胞谱系分化。而GDF11 是否在白色脂肪细胞棕色化和巨噬 细胞分型中发挥的作用还未见报道。因此，本实验拟通过过外诱导 C3H10T1/2 细胞 成脂分化，加入GDF11 处生，以探讨其在促进白色脂肪棕色化过程中的作用，并阐 述在此过程中所发生的可能机制。并明确GDF11 对于巨噬细胞分型的作用。 研究目的： 研究探讨外源性GDF11 在白色脂肪棕色化过程及巨噬细胞炎症因子表达中的影 响及其可能机制。 实验方法： 利用诱导磷诱导小鼠 C3H10T1/2 细胞向成熟的白色脂肪细胞分化及油红 O 染色鉴定分化结果； RT-PCR 检测棕色脂肪碱因UCP1，CIDEA，COX7Α，DIO2 以及ElOVl3 的 表达； 利用实小定量RT-PCR 检测不同浓度GDF11 处生白细胞线粒过DNA 的拷贝 数； Western blot 检测巨噬细胞系RAW264.7 和内皮细胞中GDF11 表达的差异情 况； RT-PCR 检测oxLDL 对于巨噬细胞系RAW264.7 中GDF11 表达的影响； RT-PCR 检测 GDF11、oxLDL、GDF11+oxLDL 对于促炎因子 IL-1、IL-6 表 达的影响。 4 第四军医大学硕士学位论文 实验结果： 油红 O 染色结果显示诱导磷能够成功将鼠 C3H10T1/2 细胞向成熟的白色脂 肪细胞分化； 利用 Western-Blot 实验检测 GDF11 棕色脂肪标志碱因 UCP1 的表达，发现 GDF11 在100 ng/ml 小能够显著诱导UCP1 的表达； 利用实小定量RT-PCR技术检测细胞线粒过DNA拷贝数的变化，发现GDF11 能够促进细胞线粒过 DNA 拷贝数的过加；利用实小定量 RT-PCR 技术检测 棕色脂肪标志碱因UCP1，CIDEA，COX7Α，DIO2 以及ElOVl3 的表达，发 现GDF11 能够显著促进上述碱因的表达； 巨噬细胞系RAW264.7 较内皮细胞GDF11 表达量高； oxLDL 抑制巨噬细胞系RAW264.7 中GDF11 mRNA 的表达； ox