金黄色葡萄球菌artr的功能研究及ranⅲ结合蛋白的鉴定-微生物学专业论文.docxVIP

优秀毕业论文 精品参考文献资料 中国科学技术大学学位论文原创性声明本人声明所呈交的学位论文，是本人在导师指导下进行研究工作所取得的成 中国科学技术大学学位论文原创性声明 本人声明所呈交的学位论文，是本人在导师指导下进行研究工作所取得的成 果。除己特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含任何他人已经发表或撰写 过的研究成果。与我一同工作的同志对本研究所做的贡献均己在论文中作了明确 的说明。 作者签名：主兰丝 签字日期： 历，f‘·／， 中国科学技术大学学位论文授权使用声明 作为申请学位的条件之一，学位论文著作权拥有者授权中国科学技术大学拥 有学位论文的部分使用权，即：学校有权按有关规定向国家有关部门或机构送交 论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅，可以将学位论文编入《中国学 位论文全文数据库》等有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制 手段保存、汇编学位论文。本人提交的电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。 保密的学位论文在解密后也遵守此规定。 ＼么开 口保密( 年) 作者签名：盏也 导师签 签字El期：如／歹．万．／ 签字日期厂2望叁笸；Z 万方数据 摘要摘要 摘要 摘要 金黄色葡萄球菌是典型的革兰氏阳性条件致病菌，在环境中分布广泛。近年 来，金黄色葡萄球菌己成为主要的临床感染菌，医院内每年都会有数以百万的金 黄色葡萄球菌感染发生。金黄色葡萄球菌感染能够引发的症状有食物中毒、溃疡、 心内膜炎、骨髓炎、肺炎等，甚至引起败血性休克而导致死亡。金黄色葡萄球菌 之所以能引起如此多的病症，是因为它能分泌多种致病因子，其中0【溶血素是非 常重要的毒素之一。在感染过程中，这些毒性因子受到了广泛而精细的调控，从 而帮助细菌响应和适应各种复杂的环境。这些调控因子包括二元信号系统、转录 调控蛋白和非编码RNA等。 我们在前期研究LuxS／AI．2信号系统时，发现了一个与luxS反向重复的 sRNA。Northern blot和RACE分析证实，这个sRNA全长为345nt，并将其命名 为ArtR。序列分析和RT-PCR等实验表明，ArtR是金黄色葡萄球菌中所特有的 一种sRNA，它的表达受到Agr群体感应系统的抑制。但是这种抑制效应不是通 过Agr群体感应系统常用的RNAIII来实现，而是直接通过AgrA蛋白与ArtR的 启动子相互作用来实现。基因敲除实验发现，ArtR的缺失影响了金黄色葡萄球 菌0【溶血素的水平。而凝胶阻滞分析实验证明，ArtR并不能直接结合0c溶血素 的mRNA。于是我们寻找了旺溶血素相关的转录因子，发现ArtR突变株中0c溶 血素的抑制因子SarT的水平有所升高。通过凝胶阻滞分析和RNA酶解等实验 我们证实ArtR通过与sarT 5UTR上的一段区域与相互作用，促进了RNase III 对sarT mRNA的降解。这项研究鉴定了金黄色葡萄球菌属中一个新的毒性相关 的sRNA，并且阐明它是通过与转录因子mRNA相互作用来实现其调控过程的。 sRNA调控不仅局限于sRNA与靶RNA的相互作用，可能有很多蛋白质参 与其中。但是由于技术的限制，对金黄色葡萄球菌中sRNA相关的蛋白质知之甚 少。我们通过前期的研究工作成功建立了利用tRNA融合RNA适配体(简称 tRSA)进行sRNA蛋白质pull．down的实验体系，选取了金黄色葡萄球菌中重 要的sRNA一一RN趾II，对其结合蛋白进行钓取。实验发现tRSA标记的RNA能 够较好被链霉亲和素磁珠捕获，用这个体系成功钓取了81个能够结合RNAIII的 候选蛋白质。我们进一步通过蛋白质表达、凝胶阻滞分析验证了这些候选蛋白与 RNAIII的结合能力。选取的9个蛋白质中，RNase III对RNAIII具有降解活性， 7个蛋白(CshA、RNase J2、Era、Hu、WaIR、Pyk、FtsZ)可以结合RNAIII， PikA没有检测出结合能力。同时选取了两个pull-down未鉴定出的，但属于RNA 万方数据 摘要降解体的蛋白，发现它们并不能够直接结合 摘要 降解体的蛋白，发现它们并不能够直接结合RNAIII。该实验表明金黄色葡萄球 菌中可能有很多蛋白质结合RNAIII，并有可能参与它的调控过程；tRSA的体系 能够很好的运用于金黄色葡萄球菌sRNA结合蛋白的pull-down实验，并且成功 鉴定出部分RNAIII的结合蛋白质。深入研究这些蛋白质对于sRNA调控以及金 黄色葡萄球菌致病性调控的作用，能够深化我们对细菌sRNA调控机制和复杂网 络的认识。 关键词： 金黄色葡萄球菌，非编码RNA，ArtR，0【溶血素，SarT，RNA结合 蛋白，tRSA，pull·down Ⅱ 万方数据 AbstractABSTRACT Abstract ABSTRACT Staphyl