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WALVAX Introduction 玉溪嘉和生物药业有限公司 1 细胞培养基础知识 王建清 内容 单抗基本知识 细胞基本知识 设备与器材准备、溶液配制 无菌技术 细胞培养 细胞计数 冻存、复苏 2 抗体基本概念及抗体结构 抗体基本概念 B细胞接受抗原刺激后增殖分化成浆细胞产生的糖蛋白 抗体的结构 四条肽链通过链间二硫键组成H2L2 重链：五类(isotype: a、g、m、d、e) 轻链：两型(k、l) 3 抗体基本概念及抗体结构 抗体的三个功能区 可变区(Variable region, VH/VL, Fv)：结合抗原 VH和VL：重链可变区与轻链可变区 高变区 HVR－抗原结合部位－互补决定区CDR 骨架区 FR1－4 恒定区(Constant region, CH/CL) 绞链区(Hinge region) 4 抗体基本概念及抗体结构 免疫球蛋白的类型 类型(Class): 重链C区抗原性 IgG、IgA、IgM、IgD、IgE 亚类(Subclass): 重链抗原性/二硫键数目位置 IgG1-4 5 单克隆抗体和基因工程单抗 6 单克隆抗体和基因工程单抗 人一鼠嵌合抗体是将鼠源单抗的可变区与人抗体的恒定区融合而得到的抗体。 7 单克隆抗体和基因工程单抗 8 鼠抗体 嵌合抗体 66% 人源化抗体 90% 全人抗体100% 单克隆抗体和基因工程单抗 9 单抗基本知识 细胞基本知识 设备与器材准备、溶液配制 无菌技术 细胞培养 细胞计数 冻存、复苏 10 细胞基础知识 细胞学的由来 细胞及细胞学说的提出：1665年英国学者Robert hooke，用自制的显微镜观察软木的薄片，第一次发现植物的细胞结构，并首次借用拉丁文Cella（小室）这个词称呼他们看到的类似于蜂巢的极小的封闭小室。德国植物学家施莱登（1838.M.J S chleiden）,动物学家施旺（1839，T.schwann）提出动植物都是细胞的集合物。使细胞及其功能有了一个较为明确的定义，确立了“细胞学说”的基本原则。这时“细胞学说”主要内容是：（1）细胞是有机体，动植物都是由细胞发育来的；（2）每个细胞都作为一个相对的独立单位，有自己的“生命”（3）新的细胞可以通过老的细胞繁殖产生。 11 细胞基本知识 细胞的基础知识 1、细胞是生命活动的基本单位：细胞是生命活动的基本单位，一切机体均由细胞构成（病毒是非细胞形态的生命）。细胞不仅是机体的基本形态机构单位，也是机体的基本功能单位，机体的生长、发育、繁殖和进化都是以细胞为基础。细胞同时也是机体发生疾病的基础。 2、细胞的基本共性：构成细胞的基本化学因素只O、C、H、N、P、S、Ca、K、Fe、Na、Cl、Mg等，他们构成细胞功能与结构所需的许多无极化合物和各种生物分子。构成细胞结构的基本生物大分子是：核酸、蛋白质、脂肪和糖类。这些大分子一般以符合分子形成如核蛋白、脂蛋白、糖蛋白或糖脂等组成细胞的重要结构。 12 3、细胞的基本结构 在亚显微结构水平上，细胞基本结构大体可以分成三种体系：主要由脂蛋白构成的生物膜系统，如细胞膜、核膜及一系列重要细胞器如：线粒体、高尔基体、内质网、溶酶体和液泡等的封闭膜；第二类主要由核酸蛋白成分构成的颗粒与显微结构系统，如染色质与核仁基质，核蛋白体等；第三类有蛋白质构成的细胞骨架（主要是微丝与微管），中心体、纺锤体、纤毛、鞭毛等专门结构。 细胞基本知识 1. 核仁 2. 细胞核 3. 核糖体 4.囊泡5.粗面内质网 6. 高尔基体 7. 细胞骨架 8. 滑面内质网 9. 线粒体 10. 液泡 11. 细胞质 12. 溶酶体 13. 中心粒 13 4、细胞作为生命活动的基本单位的共同特点：首先所有细胞表面均有一层脂蛋白成分的生物膜，使细胞能与周围环境保持相对独立性：其次所有细胞都有两种核酸，即DNA和RNA作为遗传信息的复制和转录的物质基础；第三作作为蛋白质合成的“机器”-核蛋白，是一切细胞不可缺少的基本结构；第四所有细胞都是以一分为二的分裂方式增值。第五细胞具有多样性，形状、大小、悬殊很大，结构复杂程度也很不一样。 5、原核细胞与真核细胞：这两种细胞是根据进化程度与结构的复杂程度来划分的。原核细胞（Procarytic cell）它没有典型的核结构，没有核膜，只有一个比较集中的核区，其中分布着环装DNA丝，细胞内缺少重要细胞器，但有时有核蛋白体及游离的质粒（plasmid），原核细胞的繁殖以直接分裂（无丝分裂）为主，DNA复制、RNA转录与蛋白质合成同时连续进行。 细胞基本知识 14 6、从进化角度真核细胞与原核细胞有两点区别，第一细胞膜系统的分化