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第 二 十 一 章 基因诊断与基因治疗 Genetic Diagnosis and Gene Therapy 第 一 节 基 因 诊 断Genetic Diagnosis 二、基因诊断常用技术方法 限制性内切酶谱分析法 DNA限制性长度多态性(restriction fragment length polymorphism, RFLP)分析 等位基因特异寡核苷酸探针(allele specific oligonucleotide, ASO) 三、基因诊断的应用 遗传疾病 肿瘤 感染性疾病，传染性流行病 判断个体疾病易感性 器官移植组织配型 法医学中个体识别、亲子鉴定 第 二 节  基 因 治 疗Gene Therapy 干扰RNA技术的特点 干扰因子前身为dsRNA而不是ssRNA，因而不易降解； 序列特异性抑制mRNA和蛋白质的表达； 只有效作用于外显子，而对内含子无影响； 具有高效性、长期性（可影响下两代）； 可通过细胞屏障而发挥作用。 * 目 录 * 目 录 基因变异致病类型 内源基因的变异 基因结构突变 基因表达异常 外源基因的入侵 特点 针对性强 特异性强 灵敏度高 适应性强 一、基因诊断的概念和特点 定义 利用现代分子生物学和分子遗传学的技术和方法，直接检测基因结构及其表达水平是否正常，从而对疾病作出诊断的方法。 （一）核酸分子杂交技术 （二）聚合酶链反应 (PCR) （三）基因测序 （四）基因芯片 × MstⅡ酶切位点(GCTNAGG) 5′ 3′ 正常基因 5′ 3′ 突变基因 1.15kb 1.35kb 镰状红细胞贫血患者基因组的限制性酶切分析 + ﹣ 0.2kb 1.15kb 1.35kb 正常人 突变携带着 患者 镰状红细胞贫血患者基因组的限制性酶切分析 RFLP分析法 PCR/单链构象多态性分析 (single strand conformation polymorphism, SSCP) PCR产物变性后，经聚丙烯酰胺凝胶电泳，正常基因和变异基因的迁移位置不同，借此可分析确定致病基因的存在。 正常人 纯合突变 杂合突变 Leber 病患者 PCR/SSCP分析 + ﹣ 定义 早期是指用正常的基因整合入细胞基因组，以校正和置换致病基因的一种治疗方法。 目前广义上来讲是指将某种遗传物质转移到患者细胞内，使其在体内发挥作用，以达到治疗疾病目的的方法。 一、基因治疗的概念 基因治疗的基本方法 基因矫正 (gene correction) 基因置换 (gene replacement) 基因增补 (gene augmentation) 基因失活 (gene inactivation) 几种常见的基因失活技术 反义核酸技术 核酶技术 三链技术 干扰RNA（RNAi）技术 基因治疗的其他方法：如“自杀基因”的应用，基因疫苗等