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第三章 灭菌(sterilization) 灭菌的原理及方法 培养基和发酵设备的灭菌工艺 空气除菌 灭菌：指用化学或物理的方法杀灭或去除物料及设备中所有生命物质的技术或工艺过程。  第一节 灭菌的原理及方法 一 几种常见的灭菌方法 1 化学物质灭菌 原理：药物与微生物细胞中的成分反应，使蛋白质变 性酶失活。 常用的灭菌剂: 使用范围： 器皿、双手和实验室、无菌室的环境灭菌， 不能用于培养基灭菌 常用的灭菌剂 2.?????? 辐射灭菌 原理：利用高能量的电磁辐射与菌体核酸的光化学反应造成菌体死亡。 常用：紫外线、X射线和γ射线。 使用范围：用于室内空气及器皿表面灭菌 3．干热灭菌 原理：利用高温对微生物有氧化、蛋白质变性和电解质浓缩作用而杀灭微生物。 常用方法：灼烧和电热箱加热，140-180℃ 1-2小时 使用范围：玻璃及金属用具及沙土管灭菌 4．湿热灭菌  原理：蒸汽冷凝放出大量潜热，具有穿透力，且在高温有水分条件下，蛋白质易变性。 常用方法： 水煮常压灭菌：100℃ 饱和蒸汽灭菌：一般121℃，30分钟 使用范围：培养基和发酵设备灭菌。 5．过滤除菌 原理：利用微生物不能透过滤膜除菌。 方法: 0.01~0.45 ?m孔径滤膜， 使用范围：用于压缩空气、酶溶液及其他不耐热化合物溶液除菌。 二. 湿热灭菌原理 1.生物热死动力学（对数残存定律） dN / dt =- K N N：菌体个数（个） t : 灭菌时间（min） k：反应速度常数（min-1） dN / dt: 菌受热死亡速率(个/min) Ln N/ N0 = - K t N= N0 e- K t 以菌的残留数Ln N/ N0的对数与时间t 作图，得出一条直线，其斜率为- K （P222 图14-1） 2 .反应速率常数K 如何通过实验根据对数残存定律确定某一温度,某一微生物的K ？ 1). K 与菌种的特性有关 相同温度下，微生物越耐热， k值越小。 相同温度下，微生物越不耐热，k值越大。 2). K 与灭菌温度有关 K=A e –E / RT （阿累尼乌斯方程） Ln K =Ln A- E/ RT A：比例常数 R：气体常数(J/ mol K) T：绝对温度( K) △E：杀死细菌所需的活化能（J/ mol） ?第二节 培养基和发酵设备的灭菌工艺 一．培养基灭菌时间的选择 t =1/ k * Ln( N0/ N) 其中 K：一般耐热的细菌芽孢的K值 N0 ：细菌及芽孢数之和 N：10 -3 二. 培养基灭菌温度的选择选择即能达到灭菌要求，又保证营养成分不被破坏的温度 1.培养基营养成分破坏动力学方程 -dC/dt = K’ C -dC/dt :营养物降解速度 mol / L h C: 营养物浓度 mol / L K’ : 营养物降解反应速度常数 1 / s t ：时间( S ) Ln (C/ C0 ) = - K t K’ = A’ e- E’/ RT Ln K’ =Ln A’- E’/ RT A’：比例常数 R：气体常数(J/ mol K) T：绝对温度( K) E’：营养物破坏所需的活化能（J/ mol） 2.根据实验结果灭菌活化能大于培养基破坏活化能 E＞ E’ P225 表14-11 3. 灭菌反应 营养物破坏反应 T1 Ln K1 =Ln A- E/ RT1 Ln K1’ =Ln A’- E’/ RT1 T2 Ln K2 =Ln A- E/ RT2 Ln K2’ =Ln A’- E’/ RT2 Ln ( K2/ K1) = E/ R(1/ T1- 1/ T2 ) Ln ( K2’ / K1’ )= E’/ R(1/T1- 1/T2) Ln( K2/ K1) = E Ln ( K2’ / K1’ ) E’ Ln ( K2 / K1) ＞ Ln ( K2’ / K1’ ) K2 / K1 ＞ K2’ / K1’ 当温度升高时微生物死亡速度常数比营养物质降解速度常数变化得大 4．达到相同灭菌效果，T越高，K越大，所需t 越短，采用高温短时（HTST）灭菌效果好 三 影响灭菌效果的因素 微生物种类：不同的微生物k值不同。 初始菌量：在保持N值不变的前提下，t 与初始菌量N0的对数成正比。 培养基成份：油脂、蛋白质增加微生物的耐热性。 传热与混合状况：影响受热均匀度。 培养基中固体颗粒的存在影响热穿透。 蒸汽中空气的存