基因工时程第二课时.pptVIP

第二节 基因工程的原理和技术 讨论: 怎样能够在大肠杆菌中产生人的胰岛素? 1.第一步：获取目的基因 （1）方法： ①从基因文库中获取目的基因 ②利用聚合酶链式反应(PCR)技术扩增目的基因 （目的基因的序列已知） ③人工合成目的基因（目的基因的序列已知） 实例 1： 1、下列获取目的基因的方法中需要模板链是 A.从基因文库中获取目的基因 B.利用PCR技术扩增目的基因 C.反转录法 D.通过DNA合成仪利用化学方法人工合成 目的基因与质粒的连接 4.第四、五步：筛选含有目的基因的受体细胞和目的基因表达 （1）内容： ①检测转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因（关键） ②检测目的基因是否转录出了mRNA ③检测目的基因是否翻译成蛋白质（表达） （2）常用的技术： ①DNA分子杂交技术－DNA与DNA、mRNA杂交 ②蛋白质分子（抗原－抗体）间的杂交 ③个体水平的鉴定(根据性状如抗性) （4）①答案一： b． 通过转基因技术，一是抑制正常植株A基因的表达，二是使A基因在矮生植株过量表达。 c． 测定两个实验组植株的赤霉素含量和植株。 答案二： b． 通过转基因技术，抑制正常植株A基因的表达，测定其赤霉素含量和株高。 c． 通过转基因技术，使A基因在矮生植株过量表达，测定其赤霉素含量和株高。 （答案二中b和c次序不做要求） ②与对照比较，正常植株在A基因表达被抑制后，赤霉素含量降低，株高降低；与对照比较，A基因在矮生植株中过量表达后，该植株赤霉素含量增加，株高增加。 ③基因通过控制酶的合成来控制代谢途径，进而控制生物性状。 08江苏卷·32）（8分）将动物致病菌的抗原基因导入马铃薯制成植物疫苗，饲喂转基因马铃薯可使动物获得免疫力。以下是与植物疫苗制备过程相关的图和表。 请根据以上图表回答下列问题。 （1）在采用常规PCR方法扩增目的基因的过程中，使用的DNA聚合酶不同于一般生物体内的DNA聚合酶，其最主要的特点是耐高温 （2）PCR过程中退火（复性）温度必须根据引物的碱基数量和种类来设定。表1根据模板设计的两对引物序列，图2为引物对与模板结合示意图。请判断哪一对引物可采用较高的退火温度？——。 （3）图1步骤3所用的DNA连接酶对所连接的DNA两端碱基序列是否有专一性要求？—— （4）为将外源基因转入马铃薯，图1步骤6转基因所用的细菌B通常为——。 （5）对符合设计要求的重组质粒T进行酶切，假设所用的酶均可将识别位点完全切开，请根据图1中标示的酶切位点和表2所列的识别序列，对以下酶切结果作出判断。 ①采用EcoRI和PstI酶切，得到——种DNA片断。 ②采用EcoRI和SmaI酶切，得到——种DNA片段。 （3）在上述实验中，为了防止目的基因和基因和质粒表达载体在酶切后产生的末端发生任意连接，酶切时应选用的酶是 。（4）目的基因表达时，RNA聚合酶识别和结合的位点是 ，其合成的产物是( ) * 第二节 基因工程的原理和技术 “课外读：聚合酶链式反应（PCR）”、“小资料：基因工程的受体细胞”只作为背景材料供学生阅读，不要求学生记忆或掌握具体的内容。 说明 举例说出筛选含有目的基因的受体细胞的原理 发展要求 1.简述基因工程的原理 2.描述基因工程基本步骤的几个步骤 基本要求 教学目标分析 基因工程的基本原理:让人们感兴趣 的基因在宿主细胞中稳定和高效表达. 基因工程的基本操作程序主要包括 五个基本步骤： 1）获得目的基因 2）形成重组的DNA分子 3）将重组DNA分子导入受体细胞 4）筛选含有目的基因的受体细胞 5）目的基因的表达 基因DNA文库的构建 将总DNA经过酶解，分离不同长短的DNA片段。包含的基因片段分别克隆在质粒或噬菌体载体上，转染细菌或体外包装到噬菌体颗粒上便构成了该生物的基因文库。 利用PCR技术扩增目的基因 聚合酶链式反应，在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。可以获得大量的目的基因。 循环 变性 退火 延伸 目的基因的扩增呈指数形式扩增（2n） 人工合成基因的方法 反转录法 根据已知的氨基酸序列合成DNA 根据已知蛋白质的氨基酸序列，推测出相应的信使RNA序列，然后按照碱基互补配对原则，推测出它的结构基因的核苷酸序列，再通过化学方法，以单核苷酸为原料合成目的基因。 蛋白质的氨基酸序列 mRNA的核苷酸序列 结构基因的核苷酸序列 目的基因 B、C 2、形成重组DNA分子 —— 核心 质粒 DNA分子 限制酶处理 两个切口 获得目的基因 DNA连接酶 重组DNA分子（重组质粒） 同一种 一个切