金属配合物的合成及其与人血清白蛋白相互作用的抗肿瘤活性的研究-生物化学与分子生物学专业论文.docxVIP

优秀毕业论文 精品参考文献资料 荧光染色法和FITC 荧光染色法和FITC Annexin WPI双染检测法，表明上述配合物可以诱导细胞发生凋 亡。利用JC．1染色实验、活性氧(ROS)检测实验、GSH／GSSG检测实验对C1．C4 配合物以及C4．HSA复合物诱导BEL．7404细胞凋亡机制进行了研究。JC．1染色结 果表明，上述几种物质刺激BEL．7404细胞后，用JC．1染色，发现细胞逐渐由发红 色荧光转变为发绿色荧光，表明线粒体膜电位降低，说明癌细胞发生了凋亡。ROS 和GSH／GSSG实验结果表明，相对于空白对照组而言，这几种物质使得细胞内ROS 的水平提高了，GSH／GSSG的比值降低了，其中C1．C4这四种配合物中，C4配合物 ROS水平最高，GSH／GSSG的比值最低，而Cl配合物ROS水平提高得最小、 GSH／GSSG的比值最大，这可能与这四种配合物上所带的官能团有关。 (3)采用 Western Blot检测了C1．C4配合物以及C4与HSA相互作用后对BEL．7404细胞中的 Bcl．2家族中的抗凋亡蛋白和促凋亡蛋白以及caspase．9、caSpaSe．3蛋白表达的影响， 实验结果显示：抗凋亡蛋白Bcl．2和Bcl．xl的表达下调了，而促凋亡蛋白Bax的表 达上调，导致Bax／Bcl．2的比值变大了，促使肿瘤细胞更容易发生凋亡。此外，细胞 色素C(Cyt．c)的释放促进了caspase家族蛋白的级联反应。上述实验结果证明了 C1．C4配合物以及C4配合物和HSA相互作用后对细胞的抗肿瘤活性的机制是通过 内源性线粒体介导的凋亡途径。 3．以天然白花丹素为配体(PLN)合成了四个铜(II)金属配合物，它们依次为 【Cu(PLN)2]‘2H20(C 1) [Cu(PLN)(bipy)(H20)]N03’2H20(C2) [Cu(PLN)(Phen)]N03·0．25H20(C3)；[Cu(PLN)(Phen)(Br)]CH30H(C4)。采用元素分 析、红外光谱、质谱以及单晶X一射线衍射分析等技术对这些铜金属配合物的结构进 行表征鉴定，发现这四种铜金属配合物(C1、C2、C3、C4)都是单核配合物。这 些铜(II)金属配合物结构的确定为后续的金属基药物抗肿瘤生物活性和作用机制 的研究提供了物质基础和保障。叶酸(FA)修饰的HSA载体(FA．HSA)有望改善 抗肿瘤药物的靶向性与药效。为了开发金属抗肿瘤药物的FA．HSA载体，我们研究 了FA．HSA作为由天然白花丹素为配体衍生的铜(II)金属配合物的载体的抗肿瘤 活性和机制。荧光光谱和分子对接表明，Cu(II)金属配合物结合到HSA的IIA亚 结构域上。利用MTT法研究了这四个铜金属配合物在有无FA。HSA载体的条件下 对人乳腺癌细胞(MCF．7)和人宫颈癌细胞(HeLa)这两种肿瘤细胞以及正常细胞 的细胞毒性，结果表明，与单独的铜(II)金属配合物作用于肿瘤细胞相比，在某 种程度上，通过选择性的在肿瘤细胞中积累叶酸．人血清白蛋白．金属药物复合物， 从而增强该复合物对叶酸阳性的肿瘤细胞的细胞毒性，但是没有提高对在体外的正 常细胞(WI．38)的细胞毒性；利用流式细胞仪检测法，检测裸药C3和该裸药与载 体的复合物，即叶酸一人血清白蛋白．金属药物复合物对HeLa周期的影响，结果显示， 叶酸．人血清白蛋白．金属药物复合物对HeLa的G2／M期的细胞周期阻滞能力更强， 并下调细胞周期蛋白依赖性激酶l(CDKl)和细胞周期蛋白B1的表达水平。此外， 万方数据 叶酸- 叶酸-人血清白蛋白．金属药物复合物通过线粒体介导的内源性活性氧途径，并伴随 着Bcl．2家族蛋白的调控来促进HeLa的凋亡。 本文主要研究了两类金属配合物，我们的研究可能为未来开发新型抗癌金属配 合物提供实验和理论基础以及通过合理设计人血清白蛋白载体开发金属抗癌药物的 靶向性治疗。 关键词：人血清白蛋白；载体；抗肿瘤活性；周期；凋亡 万方数据 Studies Studies on the Synthesis of Metal Complexes and Antitumour Activity of These Complexes Interaction with Human Serum Albumin Master Candidate：Zhang Zhan Supervisor：Professor Yang Feng Major：Biochemistry and Molecular Biology Grade：201 3 Research Direction：Enzymes and Protein Chemistry Abstract Two types of metal complex