基于表面修饰的明胶-硅氧烷纳米粒子和hbv病毒样颗粒作为基因载体的研究-生物医学工程专业论文.docxVIP

优秀毕业论文 精品参考文献资料 摘要摘要 摘要 摘要 本文旨在以明胶．硅氧烷纳米粒子(GS NPs)为基础，对其进行表面修饰，并 考察其携带质粒DNA在细胞和动物水平的转染效率。同时，利用变性试剂对 HBV病毒样核心颗粒在体外条件下进行解离与重组，考察其作为基因载体的潜 力。本文工作主要分为以下三个方面： 1．适配体AGR0100能够靶向识别A549细胞，引入聚乙二醇(PEG)作为桥联 剂连接明胶．硅氧烷纳米粒子与适配体AGR0100，并延长了纳米粒子在动物 体内的血液循环时间。同时进一步在纳米粒子表面连接有助于纳米粒子在细 胞内逃逸溶酶体的多肽HA2。通过纳米粒子修饰前后粒径和表面电位的变化， 证实了聚乙二醇(PEG)、适配体和HA2成功连接到纳米粒子表面。通过静 电力吸附将DNA与GS NPs进行复合，然后进行上述的表面修饰，并通过琼 脂糖凝胶电泳证实该纳米粒子能够有效载负质粒DNA。 2．通过MTT实验对明胶．硅氧烷纳米粒子(GS NPs)、聚乙二醇和适配体修饰的 明胶．硅氧烷纳米粒子(GS．PEG．Apt NPs)和聚乙二醇、适配体和多肽HA2 。修饰的明胶一硅氧烷纳米粒子(GS．PEG／HA2．Apt NPs)的细胞生物相容性进行 了评价。通过激光共聚焦显微镜和流式细胞仪证实GS NPs，GS．PEG．Apt NPs 和GS—PEG／HA2．Apt NPs均能够进入A549细胞，但是GS．PEG．Apt NPs和 GS．PEG／HA2．Apt NPs进入更多量，大约为GS NPs的两倍。同时，通过活 体成像技术观测发现：功能化的纳米粒子携带质粒DNA能够有效靶向到裸 鼠的肿瘤部位，并能够在肿瘤部位实现荧光素酶质粒pGL3的有效表达。 3．利用变性试剂尿素(Urea)、盐酸胍(GdnHCl)或含EGTA和DTT的其他变 性试剂来考察HBV病毒样核心颗粒在体外解离与重组的性质。透射电镜 (TEM)观测显示，HBV病毒样颗粒在合适浓度的变性试剂作用下能够实现 解离，且在移除变性试剂后均能很好地实现病毒样颗粒的重组，且HBV病毒 样核心颗粒和多肽Tat修饰的HBV病毒样核心颗粒进入细胞后，均具有较好 的溶酶体逃逸能力。 关键词：明胶．硅氧烷纳米粒子；表面修饰；体内外成像；HBV病毒样颗粒；解 摘要离与重组 摘要 离与重组 Abstrac[Abstract Abstrac[ Abstract This paper was aimed to decorate the surface of gelatin-siloxane nanoparticles (GS NPs)for gene vector and futher study the transfection efficiency of nanoparticles in vitro and in vivo．At the same time，this paper investigated the disassembly and reassembly of HBV virus-like particles(HBV VLPs)for the existence and removement of denaturant and studied the potential of HBV VLPs as gene vectors． The following three aspects were discussed in this paper： 1．Aptamer AGRO 1 00 can mediate the specific targeting to A549 cells．To improve the blood circulation of GS NPs，a polyethylene glycol(PEG)linkage was introduced to link GS NPs and the aptamer,and PEG molecule could significantly reduced systemic clearance．A membrane-destabilizing peptide HA2 was further conjugated to nanoparticles to improve the ability of endosomal escapoing． Through the analysis of size and zeta potential，the molecules of PEG，aptamer and HA2 Was connected to GS NPs successfully．Agarose gel electrophores