生物素-亲和素偶联探针蛋白芯片检测技术.PDF

生 物 工 程 学 报 Chin J Biotech 2008, March 25; 24(3): 515-520 journals.im.ac.cn Chinese Journal of Biotechnology ISSN 1000-3061 cjb@im.ac.cn © 2008 Institute of Microbiology, CAS CSM, All rights reserved 技术与方法 - 于晓波, 赵天明, 孙志丹, 袁宏坤, 何为, 许丹科 , 102206; 100850 : 自行制备一种新型生物素-亲和素偶联探针分子并用于反相蛋白芯片的检测。首先, 将生物素-羊抗鼠IgG 与亲 和素按照不同比例混合后与鼠 IgG 蛋白芯片反应, 观察荧光信号的放大情况; 然后以鼠 IgG-羊抗鼠 IgG 体系为研究模 式, 对反相蛋白芯片的制备条件进行了考察和优化, 包括荧光分子的非特异性吸附、点样缓冲液的选择以及蛋白的活性 等。最后, 采用此偶联探针对反相蛋白芯片进行了检测。结果表明, BSA 缓冲液制备的反相蛋白芯片可以防止非特异性 吸附, 并有利于保持固定蛋白活性和提高检测限; 另外, 与传统的与生物素-亲和素检测技术相比, 采用生物素-亲和素 偶联探针对反相芯片的检测限可以提高4 倍左右。表明亲和素-生物素偶联探针成本低、易于合成、并可以与其它的信 号放大技术联用进一步提高检测的灵敏度, 有望用于蛋白质芯片的检测。 : 生物素- 亲和素系统, 信号放大, 反相蛋白芯片 A Novel Protein Microarray Detection Technique Based on Biotin-Avidin Conjugation Probe Xiaobo Yu, Tianming Zhao, Zhidan Sun, Hongkun Yuan, Wei He, and Danke Xu State Key Laboratory of Proteomics, Beijing Proteome Research Center Department of New Proteomic Technology Beijing 102206, China; Beijing Institute of Radiation Medicine , Department of Biochemistry, Beijing 100850, China Abstract: In this experiment, a novel biotin-avidin conjugation probe was synthesized and employed in the detection of reverse- phase protein microarray. Firstly, the proportion of the biotin-avidin conjugation probe was optimized. Then the rat IgG and goat anti-rat IgG system was served as a model to optimize the fabrication conditions of reverse-phase protein microarray, including the non-specific