沈抚灌区广宿主石油烃代谢质粒的分离及鉴定-应用生态学报.PDFVIP

应 用 生 态 学 报摇 2013年11月摇 第24卷摇 第11期摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 ChineseJournal of Applied Ecology,Nov. 2013,24(11):3289-3299 沈抚灌区广宿主石油烃代谢质粒的分离及鉴定* 1,2 1** 1,2 王亚菲 摇 李摇 慧 摇 李小彬 1 2 ( 中国科学院沈阳应用生态研究所森林与土壤生态国家重点实验室,沈阳110164; 中国科学院大学,北京 100049) 摘摇 要摇 本研究采用“三亲配对外源分离法冶,从沈抚灌区土壤、底泥和水样中共计分离得到 8个广宿主(BHR)石油烃代谢质粒,并通过对其进行抗生素抗性检测和抗性遗传标记,将其 转移至大肠杆菌(Escherichia coli)EC100 宿主中进行操作. 不相容性群分析结果表明:pS3鄄 2C、pS4鄄6G为Inc P 质粒;pS3鄄2G、pW22鄄3G、pA15鄄7G 为Inc N 质粒;pS7鄄2G 为Inc W 质粒; pA23鄄1G和pA10鄄1C为Inc Q质粒.采用PCR扩增已报道的石油烃污染物降解基因的方法初 步分析其石油烃代谢功能,质粒pS3鄄2G、pS7鄄2G、pA23鄄1G、pW22鄄3G 和pA10鄄1C 上含有编码 芳香环羟化双加氧酶基因(phdA)和甲苯单加氧酶基因(touA)的片段;pA15鄄7G含有编码甲苯 双加氧酶和甲苯单加氧酶基因片段;pS3鄄2C含有编码芳香环羟化双加氧酶、苯双加氧酶和甲 苯双加氧酶基因片段;pS4鄄6G仅含有编码芳香环羟化双加氧酶基因片段.通过宿主范围检测, 除质粒pS3鄄2C 外,其余7 个质粒均可在变形菌纲(Proteobacteria)琢鄄、茁鄄、酌鄄亚纲的代表性菌株 根瘤农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)C58、钩虫贪铜菌(Cupriavidus necator)JMP228、大肠杆 菌EC100 间进行转移并稳定传代. 关键词摇 水平基因转移摇 三亲配对外源质粒分离摇 广宿主质粒摇 石油烃降解摇 生物修复 文章编号摇 1001-9332(2013)11-3289-11摇 中图分类号摇 Q938.1摇 文献标识码摇 A Isolation and characterization of petroleum catabolic broad鄄host鄄range plasmids from Shen鄄 1,2 1 1,2 1 Fu wastewaterirrigationzone. WANGYa鄄fei ,LI Hui ,LIXiao鄄bin ( StateKey Laboratory of Forest and Soil Ecology,Institute of Applied Ecology,Chinese Academy of Sciences,Shenyang 2 110164,China; University of ChineseAcademy of Sciences,Beijing 100049,China).鄄Chin.J.Ap鄄 pl.Ecol. ,2013,24(11):3289-3299. Abstract:Based on triparental mating,we isolated a total of eight broad